1. MỞ ĐẦU 1

1.1. Đặt vấn đề 1

1.2. Mục đích – Yêu cầu .2

1.2.1.Mục đích .2

1.2.2.Yêu cầu .2

2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3

2.1. Sơ lược về cây cao su Hevea brasiliensis Muell. Arg.

2.2. Sơ lược về nấm C. cassiicola (Berk. & Curt.) Wei .4

2.2.1.Lịch sử phát hiện .4

2.2.2.Phạm vi phân bố 4

2.2.3.Phạm vi ký chủ và khả năng gây bệnh .5

2.2.4.Đặc tính sinh học của C. cassiicola .5

2.3. Nấm C. cassiicola (Berk. & Curt.) Wei trên cây cao su Hevea brasiliensis Muell. Arg . 6

2.3.1.Sự xuất hiện của nấm C. cassiicola (Berk. & Curt.) Wei trên cây cao su Hevea brasiliensis 6

2.3.2.Tình hình bệnh do C. cassiicola gây ra trên cây cao su tại một số nước trồng cao su 6

2.3.3.Đặc tính sinh học của nấm C. cassiicola trên cây cao su .9

2.4. Triệu chứng bệnh của cây cao su bị nhiễm bệnh do C. cassiicola .9

2.5. Kỹ thuật polymerase chain reaction (PCR) 10

2.5.1.Nguyên tắc của phản ứng PCR . 10

2.5.2.Các yếu tố ảnh hưởng đến phản ứng PCR 12

2.6. Enzyme cắt giới hạn (restriction endonuclease – RE) . 14

2.6.1.Giới thiệu 16

2.6.2.Định danh các enzyme . 15

2.6.3.Trình tự nhận biết của các enzyme cắt giới hạn . 16

2.6.4.Sử dụng các enzyme cắt giới hạn trong phân tích DNA 16

2.6.5.Phân tích kết quả của các phản ứng cắt bằng RE . 18

2.6.6.Bản đồ giới hạn . 19

2.7. Vùng ITS và vai trò của nó trong phân tích đa dạng di truyền 19

2.8. Những nghiên cứu về C. cassiicola trong và ngoài nước 21

2.8.1.Những nghiên cứu về C. cassiicola ngoài nước .21

2.8.2.Những nghiên cứu về C. cassiicola trong nước .23

3. VẬT LIỆU VÀ PHưƠNG PHÁP TIẾN HÀNH 24

3.1. Thời gian và địa điểm tiến hành . 24

3.1.1.Thời gian .24

3.1.2.Địa điểm . .24

3.1.3.Đối tượng nghiên cứu .24

3.2. Nội dung nghiên cứu 24

3.2.1.Phân lập nấm nguồn nấm C. cassiicola .24

3.2.1.1. Hóa chất và dụng cụ 24

3.2.1.2. Phương pháp lấy mẫu 25

3.2.1.3. Phương pháp phân lập .25

3.2.2.Khuếch đại vùng ITS bằng kỹ thuật PCR .26

3.2.2.1. Chuẩn bị DNA khuôn mẫu cho phản ứng PCR .26

3.2.2.2. Thực hiện phản ứng PCR 28

3.2.2.3. Đọc kết quả của phản ứng PCR . 30

3.2.3.Phân tích sản phẩm PCR bằng các enzyme cắt giới hạn (RE) .30

3.2.3.1. Hóa chất và dụng cụ .31

3.2.3.2. Thành phần hóa chất của phản ứng RFLP 31

4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .32

4.1. Về tác nhân gây bệnh rụng lá Corynespora 32

4.2. Kết quả ly trích DNA nấm C. cassiicola 37

4.3. Kết quả PCR vùng ITS của nấm C. cassiicola 37

4.4. Kết quả phân tích RFLP sản phẩm PCR vùng ITS .40

5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ .46

5.1. Kết luận 46

5.2. Đề nghị .46

6. TÀI LIỆU THAM KHẢO 48

7. PHỤ LỤC .5