MỞ ĐẦU 1

1.1. Đặt v́n đề 1

1.2. Mục tiêu 3

1.3. Nội dung 3

1.4. Yêu cầu 3

TỔNG QUAN TÀI LIỆU 4

2.1. Tổng quan về cây dứa 4

2.1.1. Nguồn gốc và phân loại4

2.1.2. Đặc điểm thực vật học 4

2.1.3. Cây dứa Cayenne 5

2.1.4. Tình hình sản xút và tiêu thụ dứa trên thế giới và Việt Nam 7

2.2. Bệnh héo đỏ đầu lá trên cây dứa 8

2.2.1. Tình hình dịch bệnh và tác hại 8

2.2.2. Triệu chứng 9

2.2.3. Nguyên nhân gây bệnh 10

2.2.4. Tác nhân lây truyền bệnh 10

2.2.5. Cách phòng trừ 11

2.2.6. Một số nghiên cứu về bệnh héo đỏ đầu lá trên thế giới và Việt Nam 11

2.3. Tổng quan vế tính kháng bệnh trên thực vật 13

2.3.1. Khái niệm về tính kháng bệnh trên thực vật 13

2.3.2. Cơ sở sinh hóa, sinh lý của tính kháng bệnh ở thực vật 14

2.3.3. Cơ sở di truyền tính kháng bệnh ở thực vật 16

2.3.4. Phân loại tính kháng bệnh của cây trồng 18

2.3.5. Khái niệm gene đối gene (gene - for - gene concept) 19

2.3.6. Chức năng và ću trúc gene kháng 20

2.4. Phƣơng pháp PCR thoái hoá trong nghiên cứu tính kháng thực vật 24

2.4.1. Một số chiến lƣợc nghiên cứu tính kháng thực vật 24

2.4.2. Sơ lƣợc về quá trình sử dụng phƣơng pháp PCR thoái hoá 25

2.4.3. Thiết kế primer thoái hoá 27

2.4.4. Những khuyết điểm của phƣơng pháp 31

2.5. Ly trích DNA thực vật 31

2.6. Định lƣợng DNA 32

2.7. Phƣơng pháp PCR (Polymerase Chain Reaction) 32

2.7.1. Nguyên tắc của phƣơng pháp PCR 32

2.7.2. Thành phần và các yếu tố ảnh hƣởng đến phản ứng PCR 35

2.8. Giới thiệu chung về đa dạng di truyền 36

2.9. Phƣơng pháp RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) 37

2.9.1. Enzyme cắt giới hạn 37

2.9.2. Nguyên tắc của phƣơng pháp RFLP 37

VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 39

3.1. Nội dung, địa điểm và thời gian nghiên cứu 39

3.1.1. Nội dung 39

3.1.2. Địa điểm và thời gian nghiên cứu 39

3.2. Vật liệu 39

3.2.1. Vật liệu chủng bệnh 39

3.2.2. Hoá ch́t và vật liệu dùng trong li trích DNA tổng số và PCR 40

3.3. Phƣơng pháp nghiên cứu 41

3.3.1. Nội dung 1: Lây nhiễm bệnh héo đỏ đầu lá cho dứa Cayenne. 41

3.3.2. Nội dung 2: Phân lập vùng gene NBS trên các mẫu dứa thu thập. 44

3.3.3. Nội dung 3: Phân tích RFLP vùng gene NBS trên các mẫu dứa thu thập. 49

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 50

4.1. Nội dung 1: Lây nhiễm bệnh héo đỏ đầu lá cho dứa Cayenne. 50

4.1.1. Nuôi rệp 50

4.1.2. Lây nhiễm bệnh 51

4.1.3. Thu thập mẫu 54

4.2. Nội dung 2: Phân lập vùng gene NBS trên các mẫu dứa thu thập 56

4.2.1. Kết quả ly trích DNA tổng số 56

4.2.2. Kết quả pha loãng mẫu DNA tổng số 56

4.2.3. Tối ƣu phƣơng pháp PCR thoái hoá 57

4.2.4. Reamplify sản phẩm PCR 64

4.2.5. PCR trên các loại mô khác nhau 65

4.2.6. PCR thoái hoá clone vùng NBS trên các mẫu dứa Cayenne 66

4.3. Nội dung 3: Phân tích RFLP vùng gene NBS các mẫu dứa thu thập. 68

KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 69

5.1. Kết luận 69

5.2. Đề nghị 69

TÀI LIỆU THAM KHẢO 70