1. MỞ ĐẦU 1

1.1. Đặt vấn đề . 1

1.2. Nội dung 2

1.3. Mục đích .2

1.4. Yêu cầu .2

2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3

2.1. Đặc điểm sinh học của tôm sú 3

2.1.1. Phân loại 3

2.1.2. Phân bố 3

2.1.3. Vòng đời .3

2.1.4. Sinh trưởng 4

2.1.5. Dinh dưỡng 4

2.1.6. Môi trường sống 5

2.1.7. Hiện trạng nuôi tôm sú trên thế giới và tại Việt Nam .5

2.2. Bệnh đốm trắng và virus gây bệnh đốm trắng 6

2.2.1. Tình hình dịch bệnh trên thế giới và tại Việt Nam .6

2.2.2. Giới thiệu bệnh đốm trắng 9

2.2.2.1. Lịch sử và phân bố bệnh đốm trắng 9

2.2.2.2. Phân loại và tên gọi . 10

2.2.2.3. Một số đặc tính của virus đốm trắng với các yếu tố lý hoá . 11

2.2.2.4. Độc lực 12

2.2.2.5. Hình thái 12

2.2.2.6. Cấu trúc 12

2.2.2.7. Vật chất di truyền 13

2.2.2.8. Đa dạng di truyền 15

2.2.2.9. Vật chủ . 16

2.2.2.10. Cơ chế xâm nhiễm . 17

2.2.2.11. Cơ chế truyền lan . 18

2.2.2.12. Triệu chứng, bệnh tích . 19

2.2.2.13. Biện pháp phòng và trị bệnh 19

2.3. Các phương pháp chẩn đoán mầm bệnh WSSV trên giáp xác .20

2.4. Sơ lược về hoá mô miễn dịch (Immunohistochemistry) 21

2.4.1. Lịch sử phát triển .21

2.4.2. Nguyên lý 22

2.4.3. Kháng nguyên (antigen hay immunogen) .22

2.4.4. Kháng thể (antibody) .23

2.4.5. Các phương pháp nhuộm 25

2.4.6. Ứng dụng phương pháp trong chẩn đoán mầm bệnh trên động vật nuôi thủy sản 28

3. VẬT LIỆU VÀ PHưƠNG PHÁP 30

3.1. Thời gian và địa điểm nghiên cứu 30

3.2. Vật liệu 30

3.2.1. Mẫu xét nghiệm .30

3.2.2. Vật liệu nhuộm IHC 32

3.2.3. Thiết bị và dụng cụ 32

3.2.4. Hoá chất .32

3.3. Phương pháp .33

3.3.1. Bố trí thí nghiệm .33

3.3.2. Quy trình thực hiện 36

4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 41

4.1. Kết quả nội dung hoàn thiện quy trình nhuộm IHC .41

4.1.1. Thử nghiệm quy trình nhuộm IHC với 3 nồng độ DAB khác nhau 41

4.1.2. Thử nghiệm quy trình nhuộm IHC với 4 nồng độ mAB khác nhau 44

4.2. Kết quả nội dung so sánh phương pháp IHC với phương pháp Mô học truyền thống và kỹ thuật PCR về độ chính xác, độ nhạy, tính ổn định và tính hiệu quả .49

4.2.1. So sánh tính chính xác và độ nhạy của 3 phương pháp PCR, Mô học và IHC 49

4.2.2. So sánh về tính ổn định và hiệu quả của 3 phương pháp PCR, Mô học và IHC 57

5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 59 5.1. Kết luận .59

5.2. Đề nghị 59

6. TÀI LIỆU THAM KHẢO 61 6.1. Tài liệu tiếng Việt .61

6.2. Tài liệu tiếng Anh .61

PHỤ LỤC .70

Phụ lục 1: Bảng số liệu mã hoá kết quả so sánh chi tiết 4 quy trình nhuộm IHC với 4 nồng độ mAb khác nhau trên 10 mẫu thử nghiệm

Phụ lục 2: Bảng ANOVA của nội dung so sánh 4 quy trình nhuộm IHC với 4 nồng độ mAb

Phụ lục 3: Bảng số liệu mã hoá kết quả so sánh khả năng phát hiện mầm bệnh virus đốm trắng của ba phương pháp PCR, Mô học và IHC trên tôm sú post-larvae và tôm thương phẩm.

Phụ lục 4: Bảng ANOVA của nội dung so sánh khả năng phát hiện mầm bệnh virus đốm trắng của ba phương pháp PCR, Mô học và IHC