PHẦN 1. LỜI MỞ ĐẦU 1

PHẦN 2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

2.1. TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU VÀ SẢN XUẤT GIỐNG TÔM CÀNG XANH TRÊN THẾ GIỚI VÀ VIỆT NAM 3

2.1.1. Tình hình nghiên cứu sản xuất giống tôm càng xanh trên thế giới . 3

2.1.2. Tình hình nghiên cứu sản xuất giống tôm càng xanh ở Việt Nam 3

2.2. MỘT SỐ BỆNH TRÊN ẤU TRÙNG TÔM CÀNG XANH . 5

2.2.1. Bệnh hoại tử cơ . 5

2.2.2. Bệnh giữa chu kỳ ấu trùng 5

2.2.3. Bệnh hoại tử do vi khuẩn 5

2.2.4. Bệnh phát sáng 5

2.2.5. Bệnh lột xác dính vỏ . 6

2.2.6. Bệnh do Protozoa 6

2.2.7. Bệnh virus . 6

2.2.8. Bệnh trắng đuôi 6

2.3. NHỮNG PHưƠNG PHÁP DÙNG TRONG CHẨN ĐOÁN BỆNH TRẮNG ĐUÔI DO VIRUS GÂY RA TRÊN TÔM CÀNG 10

2.3.1. Phương pháp mô học 10

2.3.2. Phương pháp lai Dot-lot 10

2.3.3. Phương pháp lai tại chỗ (in situ hybridization) 11

2.3.4. Phương pháp Sandwich - ELISA (A sandwich enzyme linked immunosorbent assay) .12

2.3.5. Phương pháp PCR (Polymerase Chain Reaction) . 12

2.3.6. Phương pháp RT -PCR (Reverse Transcription Polymerase Reaction) .15

PHẦN 3. VẬT LIỆU VÀ PHưƠNG PHÁP

3.1. NỘI DUNG, THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 18

3.2. VẬT LIỆU . 18

3.2.1. Mẫu tôm 18

3.2.2. Mồi sử dụng cho qui trình . 18

3.2.3. Hạt Bead RT - PCR: Ready - To - Go (Chế phẩm sử dụng ngay) 19

3.2.4. Bộ Kit AquaPure RNA Isolation Kit . 19

3.2.5. Thang DNA X174 RF Hae III (Boehringer Mannheim) 20

3.2.6. Hoá chất khác 20

3.2.7. Dụng cụ và thiết bị 21

3.3. PHưƠNG PHÁP . 21

3.3.1. Phương pháp tách chiết RNA virus 21

3.3.1.1. Tách chiết RNA bằng Trizol 21

3.3.1.2. Tách chiết bằng AquaPure RNA Isolation kit (Bio-Rad) 22

3.3.2. Phương pháp Single - Step RT - PCR trên RNA của MrNV, XSV 22

3.3.3. Phương pháp điện di nucleic acid trên gel agarose 23

3.4. BỐ TRÍ THÍ NGHIỆM 24

3.4.1. Thử nghiệm qui trình Single - Step RT-PCR phát hiện MrNV, XSV từ mẫu tôm bệnh (chứng dương) được cung cấp từ Ấn

Độ

3.4.2. Khảo sát một số điều kiện của qui trình Single - Step RT-PCR . 24

3.4.2.1. So sánh hai qui trình tách chiết RNA bằng Trizol (Peter Walker) và AquaPure RNA Isolation Kit (Bio-Rad) .24

3.4.2.2. Khảo sát nồng độ mồi

3.4.2.3. Khảo sát nhiệt độ lai của mồi 25

3.4.3. Ứng dụng qui trình khảo sát được kiểm tra một số mẫu tôm càng xanh thu thực địa .25

PHẦN 4. KẾT QUẢ - THẢO LUẬN

4.1. KẾT QUẢ THỬ NGHIỆM QUI TRÌNH SINGLE - STEP RT - PCR PHÁT HIỆN MrNV, XSV TỪ MẪU TÔM BỆNH ĐưỢC CUNG CẤP TỪ

ẤN ĐỘ. 26

4.2. KẾT QUẢ KHẢO SÁT MỘT SỐ ĐIỀU KIỆN CỦA QUI TRÌNH SINGLE -STEP RT - PCR . 27

4.2.1. Kết quả so sánh hai qui trình tách chiết. 27

4.2.2. Kết quả khảo sát nồng độ mồi 30

4.2.3. Kết quả khảo sát nhiệt độ lai của mồi 30

4.3. KẾT QUẢ ỨNG DỤNG QUI TRÌNH KHẢO SÁT ĐưỢC KIỂM TRA MỘT SỐ MẪU TÔM CÀNG XANH THU THỰC ĐỊA .32

PHẦN 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ

5.1. Kết luận . 36

5.2. Tồn tại . 36

5.3. Đề xuất 37

TÀI LIỆU THAM KHẢ