PHẦN 1: MỞ ĐẦU

1.1 Đặt vấn đề 1

1.2 Mục đích của đề tài 2

1.3 Yêu cầu 2

PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU

2.1 Sơ lược lịch sử nghiên cứu sán lá gan và bệnh do sán lá gan lớn gây nên 3

2.2 Vòng đời của sán lá gan lớn (Fasciola sp) 3

2.3 Hình thái sinh học của sán lá gan lớn (Fasciola sp) 5

2.4 Tác hại của bệnh do sán lá lớn ở gan 6

2.4.1 Ở gia súc 6

2.4.2 Ở người 7

2.5. Chẩn đoán, phòng ngừa và điều trị bệnh sán lá gan lớn 8

2.5.1 Ở gia súc 8

2.5.2 Ở người 9

2.6 Dịch tiết từ sán lá gan lớn trong thời gian ký sinh có vai trò sinh học 11

2.6.1 Protein tiết và đáp ứng miễn dịch 11

2.6.2 Hoạt động protease 12

PHẦN 3: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU.

3.1 Thời gian và địa điểm 13

3.2 Vật liệu 13

3.2.1 Đối tượng nghiên cứu 13

3.2.2 Thiết bị và dụng cụ 13

3.2.2.1 Thiết bị 13

3.2.2.2. Dụng cụ 14

3.2.3 Hóa chất và cách chuẩn bị các dung dịch 14

3.3 Phương pháp 17

3.3.1 Quy trình lấy mẫu 17

3.3.2 Định lượng protein bằng phương pháp đo mật độ quang OD280 17

3.3.3 Xác định nồng độ protein bằng phương pháp Bradford 18

3.3.4 Điện di SDS-PAGE 12% xác định thành phần protein trong dịch tiết của sán lá gan lớn Fasciola gigantica .21

3.3.5 Phương pháp miễn dịch khuếch tán kép Ouchterlony 26

3.3.6 Quy trình tạo cột sắc ký ái lực miễn dịch để tinh chế kháng thể đặc hiệu với kháng nguyên tiết của sán lá gan lớn. 27

3.3.7 Kỹ thuật ELISA phát hiện kháng nguyên tiết trong huyết thanh hoặc trong phân bệnh nhân 28

PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

4.1 Nồng độ protein trong dịch tiết của sán lá gan lớn được xác định bằng phương pháp Bradford 31

4.2 Kết quả điện di SDS-PAGE 12% xác định thành phần protein trong dịch tiết của sán lá gan lớn 31

4.3 Kết quả khuếch tán miễn dịch Ouchterlony kiểm tra độ đặc hiệu của kháng nguyên tiết trong vật liệu tiết của sán lá gan lớn so với kháng nguyên thân của chính nó 33

4.4 Kết quả tinh chế kháng thể kháng Fasciola sp từ huyết thanh bệnh nhân 33

4.5 Giải hấp kháng thể từ cột sắc ký ái lực tạo với kháng nguyên tiết 35

4.6 Kết quả phát hiện kháng nguyên tiết trong huyết thanh bệnh nhân bằng phương pháp ELISA 35

PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 37

PHẦN 6: TÀI LIỆU THAM KHẢO . 38

PHỤ LỤC 4