PHẦN I. MỞ ĐẦU 1

1.1 Đặt vấn đề 1

1.2 Mục tiêu và yêu cầu 2

1.2.1 Mục tiêu 2

1.2.2 Yêu cầu 2

PHẦN II. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

2.1 Khái quát về nguồn mẫu chiết xuất DNA 3

2.1.1 Đặc điểm về ngoại hình các giống bò 3

2.1.2 Đặc điểm về nguồn mô chiết xuất DNA 3

2.1.2.1 Một vài đặc điểm về cơ bò 3

2.1.2.2 Một vài đặc điểm về lông bò 3

2.2 Cơ sở xác định giới tính 4

2.2.1 Lịch sử khám phá cơ chế xác định giới tính tự nhiên ở động vật 4

2.2.2 Sơ lược về NST giới tính 5

2.2.2.1 Các gen trên NST Y 6

2.2.2.2 Các gen trên NST X 8

2.3 Các phương pháp xác định giới tính 9

2.3.1 Kiểm tra hoạt động enzyme liên kết NST 9

2.3.2 Phản ứng miễn dịch đối với kháng nguyên chuyên biệt giới tính 10

2.3.3 Phân tích di truyền tế bào để xác định giới tính 11

2.3.4 Sử dụng đoạn dò DNA chuyên biệt NST Y để phân biệt giới tính phôi 11

2.3.5 Phân biệt giới tính bằng kỹ thuật polymerase chain reaction (PCR) 12

2.3.5.1 Cơ sở phản ứng PCR dùng để phân biệt giới tính 12

2.3.5.2 Một số công trình xác định giới tính bằng PCR 13

PHẦN III. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15

3.1 Nội dung nghiên cứu 15

3.2 Thời gian và địa điểm tiến hành 15

3.3 Vật liệu 15

3.3.1 Nguồn mẫu chiết xuất DNA 15

3.3.2 Đoạn mồi 15

3.4 Phương pháp tiến hành 16

3.4.1 Lấy và bảo quản mẫu 16

3.4.2 Ly trích DNA 16

3.4.2.1 Ly trích DNA từ cơ 16

3.4.2.2 Ly trích DNA từ lông 18

3.4.3 Multiplex PCR xác định giới tính 19

3.4.3.1 Xây dựng qui trình PCR xác định giới tính bò 19

3.4.3.2 Áp dụng qui trình PCR để xác định giới tính bò 20

3.4.4 Điện di và quan sát sản phẩm PCR 20

3.4.4.1 Chuẩn bị gel agarose 1,5% 21

3.4.4.2 Điện di sản phẩm PCR 21

3.5 Xử lý số liệu 21

PHẦN IV. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 22

4.1 Ly trích DNA 22

4.1.1 So sánh DNA ly trích từ cơ thu hồi theo hai mức độ làm khô 22

4.1.2 So sánh DNA ly trích từ cơ và lông 22

4.1.3 Kết quả ly trích DNA từ gốc lông và ngọn lông 23

4.2 PCR xác định giới tính 25

4.2.1 Kết quả xây dựng qui trình PCR 25

4.2.1.1 So sánh hai chu trình nhiệt 25

4.2.1.2 Thử nghiệm ba loại Taq 26

4.2.2 Áp dụng qui trình PCR 28

4.2.2.1 Xác định giới tính của ba giống bò với DNA từ cơ 28

4.2.2.2 Kết quả PCR với DNA từ cơ được phơi khô theo hai mức độ 29

4.2.2.3 So sánh kết quả PCR trên DNA của cơ và lông 30

PHẦN V. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 32

5.1 Kết luận 32

5.2 Đề nghị 32

TÀI LIỆU THAM KHẢO 33

PHỤ LỤC 3