1. MỞ ĐẦU . 1

1.1 Đặt vấn đề . 1

1.2 Mục đích .2

1.3 Yêu cầu .2

2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

2.1 Sơ lược về khoai tây và bệnh trên khoai tây .3

2.2 Giới thiệu về virus PVX, PVY và PLRV gây bệnh trên khoai tây .4

2.2.1 Sơ lược về virus PVX (Potato virus X) 4

2.2.2 Sơ lược về virus PVY (Potato virus Y) 5

2.2.3 Sơ lược về virus PLRV (Potato leafroll virus) .6

2.3 Các phương pháp chẩn đoán bệnh cây .8

2.3.1 Phương pháp chẩn đoán bên ngoài 8

2.3.2 Phương pháp sinh học 8

2.3.3 Phương pháp quang phổ .8

2.3.4 Phương pháp so sánh độ đục của dịch cây .8

2.3.5 Phương pháp chiết quang kép 9

2.3.6 Phương pháp chẩn đoán bằng kính hiển vi điện tử 9

2.3.7 Phương pháp ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) .9

2.3.7.1 Phương pháp ELISA trực tiếp kiểu Sandwich . 10

2.3.7.2 Phương pháp ELISA gián tiếp (Indirect ELISA) 10

2.3.8 Phương pháp RT-PCR . 10

2.3.9 Phương pháp giải trình tự gen 11

2.4 Nghiên cứu trong và ngoài nước về PVX, PVY và PLRV trên khoai tây . 12

2.4.1 Nghiên cứu trong nước về virus PVX, PVY và PLRV 12

2.4.2 Nghiên cứu nước ngoài về virus PVX, PVY, PLRV . 13

3. VẬT LIỆU VÀ PHưƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14

3.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu . 14

3.2 Vật liệu nghiên cứu 14

3.2.1 Vật liệu dùng trong kỹ thuật ELISA phát hiện PVX, PVY và PLRV 14

3.2.2 Vật liệu dùng trong kỹ thuật RT-PCR để phát hiện PLRV . 15

3.2.2.1 Vật liệu dùng trong ly trích RNA . 15

3.2.2.2 Vật liệu dùng trong phản ứng RT-PCR 15

3.3 Phương pháp nghiên cứu . 16

3.3.1 Nội dung nghiên cứu . 16

3.3.2 Phương pháp điều tra và lấy mẫu 16

3.3.3 Phương pháp phát hiện PVX, PVY và PLRV . 17

3.3.3.1 Phát hiện virus PVX, PVY và PLRV bằng kĩ thuật ELISA . 17

3.3.3.2 Phát hiện virus PLRV bằng phương pháp RT-PCR 20

3.3.3.3 Giải trình tự trực tiếp đoạn gen của virus PLRV 25

4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .27

4.1 Tình hình canh tác khoai tây tại Thành phố Đà Lạt 27

4.2 Kết quả phát hiện virus PVX, PVY và PLRV bằng kỹ thuật ELISA 27

4.2.1 Kết quả kiểm tra ELISA tại các phường .27

4.2.2 Kết quả ELISA theo từng giống 29

4.2.3 Kết quả ELISA theo từng thế hệ .30

4.2.4 Kết quả ELISA theo tháng tuổi .30

4.3 Kết quả RT-PCR 31

4.4 Kết quả giải trình tự .34

5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ .37

6. TÀI LIỆU THAM KHẢO 38

PHỤ LỤC .40