1. MỞ ĐẦU 1

1.1. Đặt vấn đề 1

1.2. Mục tiêu – yêu cầu 2

1.2.1. Mục tiêu 2

1.2.2. Yêu cầu 2

2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

2.1. Vi khuẩn E. coli 3

2.1.1 Đặc điểm sinh học 3

2.1.2. Yếu tố kháng nguyên 3

2.1.3. Phân loại E. coli 4

2.2. Shiga toxigenic E. coli (STEC) 5

2.2.1.Thuật ngữ 5

2.2.2. Các yếu tố liên quan đến đặc tính gây bệnh của STEC 6

2.2.2.1. Độc tố Shiga (Stx) 6

2.2.2.2. Enterohemolysin 8

2.2.2.3. Yếu tố bám dính 8

2.2.3. Cách sinh bệnh 9

2.2.4. Khía cạnh lâm sàng 10

2.2.5. Dịch tễ học 11

2.2.6. Chẩn đoán 12

2.2.7. Phòng ngừa 12

2.3. Serotype O157:H7 12

2.4. Kỹ thuật PCR 14

2.4.1. Khái niệm 14

2.4.2. Nguyên tắc 14

2.4.3. Các thành phần cần thiết của phản ứng PCR 15

2.4.4. Phân tích kết quả PCR 16

2.4.5 Multiplex – PCR 16

2.4.6. Ứng dụng 16

3. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP THỰC HIỆN 18

3.1.Thời gian và địa điểm thực hiện 18

3.1.1. Thời gian 18

3.1.2. Địa điểm 18

3.2. Nội dung thực hiện 18

3.3. Phương pháp thực hiện 18

3.3.1 Vật liệu thí nghiệm cơ bản . 18

3.3.2. Cách lấy mẫu và bảo quản mẫu 19

3.3.2. Nuôi cấy và phân lập E. coli 19

3.3.2.1. Môi trường nuôi cấy 19

3.3.2.2. Qui trình phân lập, định tính 19

(1) Nuôi cấy và phân lập 19

(2) Chọn khuẩn lạc E. coli 20

(3) Thử sinh hóa 20

3.3.3. Ly trích DNA 20

3.3.4. Qui trình multiplex – PCR 22

3.3.5. Điện di, đọc kết quả 23

4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 24

4.1. Kết quả phát hiện các gen độc lực của E. coli phân lập được từ phân bò tiêu chảy 24

4.2. Kết quả phát hiện gen độc lực của E. coli phân lập được từ phân heo con cai sữa tiêu chảy 26

4.3. Kết quả phát hiện các gen độc lực của E. coli phân lập được từ phân bê tiêu chảy 28

4.4. Kết quả phát hiện gen độc lực của E. coli phân lập được từ bề mặt thịt bò 29

4.5 Tổng kết kết quả phát hiện gen độc lực của E. coli trên các mẫu khảo sát có nguồn gốc từ bò và heo 31

5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 34

5.1. Kết luận 34

5.2. Tồn tại và đề nghị 34

6. TÀI LIỆU THAM KHẢO 36

7. PHỤ LỤC 41