1. MỞ ĐẦU 1

1.1. Đặt vấn đề 1

1.2. Mục tiêu và yêu cầu đề tài 2

1.2.1. Mục tiêu 2

1.2.2. Yêu cầu đề tài 2

1.3.Đối tƣợng nghiên cứu 2

2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

2.1. Giới thiệu nấm Metarhizium anisopliae 3

2.2. Sơ lƣợc về phƣơng thức xâm nhiễm của nấm ký sinh trên côn trùng. 6

2.3. Hoạt tính sinh học 7

2.4. Hiệu quả phòng trừ sâu hại bằng chế phẩm nấm

2.5. Một số nghiên cứu trong nƣớc và ngoài nƣớc về nấm Metarhizium anisopliae và những nấm ký sinh côn trùng khác ứng dụng để phòng trừ sâu hại. 8

2.5.1. Nghiên cứu trong nƣớc 8

2.5.2. Nghiên cứu ngoài nƣớc 9

2.6. Giới thiệu gen Pr1 10

2.7. Vai trò của Protease Pr1 10

2.8.Tổng quan về ITS-rDNA 10

2.8.1. Giới thiệu về vùng rDNA và vùng ITS 10

2.9. Một số nghiên cƣ́u trong nƣớc và nƣớc ngoài về sƣ̣ đa dạng của nấm Metarhizium anisopliae dƣ̣a vào gen Pr1 và vùng rDNA-ITS 12

2.9.1. Nghiên cƣ́u nƣớc ngoài 12

2.9.2. Nghiên cƣ́u trong nƣớc 14

2.10. Phƣơng pháp phát hiện gen Pr1 và vùng rDNA-ITS 14

3. VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16

3.1. Thời gian và địa điểm 16

3.1.1. Thời gian 16

3.1.2. Địa điểm 16

3.2. Vật liệu và hoá chất 16

3.2.1. Vật liệu 16

3.2.2. Hoá chất 17

3.2.3. Các thiết bị chính 17

3.3. Nội dung nghiên cứu 18

3.4. Phƣơng pháp nghiên cứu 18

3.4.1.Kiểm tra DNA tổng số đƣợc ly trích tƣ̀ các dòng nấm Metarhizium anisopliae 18

3.4.2. Khuếch đại gen Pr1 18

3.4.3. Khuếch đại vùng rDNA-ITS 21

3.5. Tiến hành giải trình tƣ̣ gen gây độc Pr1 và vùng ITS 22

3.6. Tinh sạch sản phẩm PCR 22

3.7. Tinh sạch sản phẩm đọc trình tự24

3.8. Phƣơng pháp phân tích trình tƣ̣ 24

4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 26

4.4. DNA của các mẫu nấm Metarhizium anisopliae đƣợc dùng trong nghiên cƣ́u 26

4.5. Kết quả tinh sạch DNA tổng số 28

4.6. Kết quả khuếch đại vùng ITS1-5.8S-ITS2. 28

4.7. Kết quả giải trình tƣ̣ vùng ITS1-5.8S-ITS2 29

4.8. Kết quả khuếch đại gen Pr136

4.9. Kết quả đọc trình tƣ̣ gen Pr136

5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 42

5.4. Kết luận 42

5.4.2. Phát hiện và đọc trình tự gen Pr1 42

5.4.3. Phát hiện và đọc trình tự vùng rDNA-ITS 42

5.5. Đề nghị 43

5.6. Hạn chế của đề tài 43

6. TÀI LIỆU THAM KHẢO 44

7. PHỤ LỤC 4