MỤC LỤCTRANGLời cảm tạ iiiTóm tắt ivSummary vMục lục . viDanh sách các chữ viết tắt . ixDanh sách các bảng . xDanh sách các sơ đồ, biểu đồ, hình xi1. MỞ ĐẦU . 11.1. Đặt vấn đề 11.2. Mục tiêu – yêu cầu . 21.2.1. Mục tiêu 21.2.2. Yêu cầu . 22. TỔNG QUAN TÀI LIỆU . 32.1. Vi khuẩn E. coli 32.1.1 Đặc điểm sinh học 32.1.2. Yếu tố kháng nguyên . 32.1.3. Phân loại E. coli . 42.2. Shiga toxigenic E. coli (STEC) 52.2.1.Thuật ngữ . 52.2.2. Các yếu tố liên quan đến đặc tính gây bệnh của STEC . 62.2.2.1. Độc tố Shiga (Stx) . 62.2.2.2. Enterohemolysin 82.2.2.3. Yếu tố bám dính . 82.2.3. Cách sinh bệnh . 92.2.4. Khía cạnh lâm sàng . 102.2.5. Dịch tễ học 112.2.6. Chẩn đoán . 122.2.7. Phòng ngừa . 12

2.3. Serotype O157:H7 . 122.4. Kỹ thuật PCR . 142.4.1. Khái niệm 142.4.2. Nguyên tắc 142.4.3. Các thành phần cần thiết của phản ứng PCR . 152.4.4. Phân tích kết quả PCR . 162.4.5 Multiplex – PCR . 162.4.6. Ứng dụng . 163. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP THỰC HIỆN . 183.1.Thời gian và địa điểm thực hiện 183.1.1. Thời gian 183.1.2. Địa điểm . 183.2. Nội dung thực hiện . 183.3. Phương pháp thực hiện 183.3.1 Vật liệu thí nghiệm cơ bản 183.3.2. Cách lấy mẫu và bảo quản mẫu 193.3.2. Nuôi cấy và phân lập E. coli 193.3.2.1. Môi trường nuôi cấy . 19

3.3.2.2. Qui trình phân lập, định tính . 19

(1) Nuôi cấy và phân lập . 19

(2) Chọn khuẩn lạc E. coli . 20

(3) Thử sinh hóa . 20

3.3.3. Ly trích DNA . 203.3.4. Qui trình multiplex – PCR . 223.3.5. Điện di, đọc kết quả 23

[TABLE="width: 100%"]

[TABLE="width: 100%"]

4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN . 244.1. Kết quả phát hiện các gen độc lực của E. coli phân lập được từ phân bò tiêu chảy 24

4.2. Kết quả phát hiện gen độc lực của E. coli phân lập được từ phân heo con cai sữa tiêu chảy 26

4.3. Kết quả phát hiện các gen độc lực của E. coli phân lập được từ phân bê tiêu chảy 28

4.4. Kết quả phát hiện gen độc lực của E. coli phân lập được từ bề mặt thịt bò 29

4.5 Tổng kết kết quả phát hiện gen độc lực của E. coli trên các mẫu khảo sát có nguồn gốc từ bò và heo . 31

5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ . 34

5.1. Kết luận 345.2. Tồn tại và đề nghị . 346. TÀI LIỆU THAM KHẢO . 367. PHỤ LỤC

Đề tài được thực hiện nhằm phát hiện các gen độc lực stx1, stx2, eae, ehxA, và gen uid của vi khuẩn E. coli được phân lập từ 27 mẫu phân tiêu chảy của bò, heo, bê và 9 mẫu bề mặt thịt bò bằng kỹ thuật multiplex – PCR. Quan sát và ghi nhận trên môi trường MAC chỉ có một loại khuẩn lạc hồng, trên môi trường SMAC có hai loại khuẩn lạc hồng và trắng, trên môi trường CT-SMAC cũng có hai loại khuẩn lạc hồng và trắng. Mỗi nhóm chọn khoảng 6 – 10 khuẩn lạc riêng lẻ. Ly trích DNA theo nhóm khuẩn lạc và từng khuẩn lạc riêng lẻ theo phương pháp nhiệt. Kết quả multiplex - PCR được ghi nhận như sau:

[*]Nhóm khuẩn lạc có mang gen độc lực thì chưa chắc từng khuẩn lạc riêng lẻ có mang gen độc lực đó.

[*]100% mẫu phân tiêu chảy đều có E. coli mang gen gây dung huyết ehxA. Tần số phát hiện gen stx của E. coli từ những mẫu phân tiêu chảy lần lượt là: 50% ở bò, 44,4% ở heo cai sữa và 100% trên bê.

[*]Ở phân bò tiêu chảy: có 5/10 mẫu (50%) phát hiện E. coli mang gen độc lực thuộc nhóm Stx; 10/10 mẫu (100%) phát hiện E. coli mang gen ehxA; 4/10 mẫu (40%) E. coli mang gen stx2, 1/10 mẫu (10%) E. coli mang gen stx1; và không phát hiện được gen uid và eae.

[*]Ở phân heo cai sữa tiêu chảy: có 4/9 mẫu (44,4%) phát hiện E. coli mang gen stx, trong đó có ¼ mẫu mang gen stx1 (25%) và ¾ mẫu mang gen stx2 (75%), không có mẫu nào mang gen uid và eae, 9/9 mẫu (100%) mang gen ehxA.

[*]Ở phân bê tiêu chảy: có 8/8 mẫu (100%) phát hiện được ít nhất 1 gen độc lực, có mẫu phát hiện 2 -3 gen độc lực; 8/8 mẫu (100%) phát hiện được gen ehxA; 7/8 mẫu (87,5%) phát hiện được gen stx1; 1/8 mẫu (12,5%) phát hiện được gen stx2. Trong khi đó, không phát hiện được gen uid trong bất kì mẫu nào, 7/8 (87,5%) mẫu đều hiện diện cả gen ehxA và stx.

[*]9 mẫu bề mặt thịt bò khảo sát hoàn toàn chưa phát hiện được gen độc lực của E. coli.

[*]Chưa phát hiện được gen uid và eae trong 27 mẫu phân tiêu chảy của bò, bê và heo cai sữa; và 9 mẫu bề mặt thịt.