PHẦN : MỞ ĐẦU

1. TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI

Ung thư là bệnh rất nguy hiểm, mỗi năm có hơn 6 triệu người chết vì bệnh ung thư, 1.4 triệu ca ung thư mới được chẩn đoán trên thế giới. Theo đánh giá của Tổ chức y tế thế giới (WHO), trong 20 mươi năm tới các con số trên sẽ gia tăng và lên đến 10 triệu trường hợp tử vong và trên 16 triệu ca ung thư mới. Ở Việt Nam, bên cạnh các bệnh nhiễm khuẩn và suy dinh dưỡng ngày càng giảm dần, thì bệnh ung thư, bệnh tim mạch, tâm thần đang có nguy cơ gia tăng. Các loại ung thư hay gặp ở nước ta là ung thư phổi, dạ dày, vú, gan, vòm họng, đại trực tràng, hạch bạch huyết, tử cung, buồng trứng . Trong khi ở nhiều nước, chương trình sàng lọc phát hiện sớm ung thư đạt kết quả tốt, đã góp phần chữa khỏi hơn 50% bệnh nhân ung thư thì ở nước ta đa số người bị ung thư khi được chẩn đoán đã ở giai đoạn muộn, tỉ lệ chữa khỏi bệnh còn rất thấp. Các loại ung thư thường gặp tính chung cả 2 giới nam và nữ, ước tính hàng năm trên toàn cầu cho thấy khoảng 10,9 triệu ca ung thư mới mắc và khoảng 6,7 triệu người chết vì ung thư (2002) Tại VN, hàng năm có khoảng 100.000-150.000 trường hợp mới mắc ung thư và khoảng 70.000 người chết do ung thư. Ở VN, qua nghiên cứu ở TPHCM và Hà Nội cho thấy 10 loại ung thư thường gặp ở nam và nữ là: ung thư gan, ung thư phổi. ung thư dạ dày, ung thư đại trực tràng, ung thư cổ tử cung, ung thư vú, ung thư tiền liệt tuyến, ung thư bạch cầu, ung thư buồng trứng, ung thư tuyến giáp .

Giai đoạn mắc bệnh ung thư thì người bệnh thường không phát hiện được, đến khi người bệnh phát hiện được thì thường ở giai đoạn nặng và không thể cứu chữa được. Đôi khi các bác sĩ còn chẩn đoán sai dẫn đến việc chữa và trị đi sai hướng dẫn tới bệnh nhân chịu hậu quả rất nặng. Việc chẩn đoán chính xác và phát hiện sớm là điều rất quan trọng cho việc điều trị. Có nhiều phương pháp chẩn đoán nhưng mỗi phương pháp lại có hạn chế nhất định trong việc xác định chính xác loại ung thư để điều trị cho thích hợp. Hiện nay, để chẩn đoán sớm được bệnh một cách nhanh chóng và chính xác, người ta sử dụng phương pháp chẩn đoán bằng kháng thể đơn dòng. Phương pháp này có đặc điểm là rất đặc hiệu với kháng nguyên tức là nó chỉ nhận biêt duy nhất một loại kháng nguyên khi đưa vào cùng một lúc với các kháng nguyên khác. Nên kết quả sẽ không bị nhầm lẫn mà ngược lại là độ chính xác lại rất cao. Vì vậy, để góp phần vào công tác chẩn đoán kịp thời, nhanh chóng chính xác và đưa ra liệu pháp điều trị thích hợp do đó chúng tôi thực hiện đề tài “nghiên cứu tạo dòng tế bào lai sinh kháng thể đơn dòng kháng AFP hỗ trợ chẩn đoán sớm bệnh ung thư tế bào gan ở người”

MỤC LỤC

[URL="/#_Toc40062233"]LỜI CẢM ƠN i

[URL="/#_Toc40062234"]DANH MỤC VIẾT TẮT. ii

[URL="/#_Toc40062235"]MỤC LỤC iii

[URL="/#_Toc40062236"]DANH MỤC BẢNG vi

[URL="/#_Toc40062237"]DANH MỤC HÌNH ẢNH VÀ ĐỒ THI vii

[URL="/#_Toc40062238"]PHẦN : MỞ ĐẦU 1

[URL="/#_Toc40062239"]1. TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI 1

[URL="/#_Toc40062240"]2. MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU 2

[URL="/#_Toc40062241"]3. Ý NGHĨA KHOA HỌC 2

[URL="/#_Toc40062242"]4. Ý NGHĨA THỰC TIỄN 2

[URL="/#_Toc40062243"]Chương 1: [URL="/#_Toc40062244"]TỔNG QUAN TÀI LIỆU VÀ CƠ SỞ KHOA HỌC CỦA ĐỀ TÀI 3

[URL="/#_Toc40062245"]1.1. GIỚI THIỆU VỀ BỆNH UNG THƯ NÓI CHUNG VÀ ALPHA-FETOPROTEIN 3

[URL="/#_Toc40062246"]1.1.1. TÌM HIỂU VỀ BỆNH UNG THƯ 3

[URL="/#_Toc40062247"]1.1.1.1. Giai đoạn khởi đầu. 5

[URL="/#_Toc40062248"]1.1.1.2.Gai đoạn phát triển. 6

[URL="/#_Toc40062249"]1.1.1.3. Giai đoạn ung thư di căn. 7

[URL="/#_Toc40062250"]1.1.2.ALPHA – FETOPROTEIN (AFP) 7

[URL="/#_Toc40062251"]1.1.2.1 Dấu ấn ung thư (tumor marker) và AFP. 7

[URL="/#_Toc40062252"]1.1.2.2. Bản chất và nguồn gốc của alpha-fetoprotein. 9

[URL="/#_Toc40062253"]1.1.2.2.1. Tình hình ứng dụng kháng thể đơn dòng kháng AFP để chẩn đoán sớm bệnh ung thư gan ở nước ngoài và trong nước. 10

[URL="/#_Toc40062254"]1.2. GIỚI THIỆU VỀ MIỄN DỊCH VÀ KHÁNG THỂ ĐƠN DÒNG 11

[URL="/#_Toc40062255"]1.2.1. MIỄN DỊCH HỌC VÀ KHÁNG NGUYÊN 11

[URL="/#_Toc40062256"]1.2.1.1. Các khái niệm về miễn dịch học. 11

[URL="/#_Toc40062257"]1.2.1.1.1. Đáp ứng miễn dịch tự nhiên (Natural immunity) 11

[URL="/#_Toc40062258"]1.2.1.2. Hệ thống các cơ quan và tế bào tham gia vào đáp ứng miễn dịch. 14

[URL="/#_Toc40062259"]1.2.1.2.1. các cơ quan dạng lympho. 14

[URL="/#_Toc40062260"]1.2.1.2.2. Tế bào miễn dịch. 15

[URL="/#_Toc40062261"]1.2.1.3. Giới thiệu về kháng nguyên (Antigen) 16

[URL="/#_Toc40062262"]1.2.1.3.1. khái niệm kháng nguyên. 16

[URL="/#_Toc40062263"]1.2.1.3.2 Những đặc tính của kháng nguyên. 16

[URL="/#_Toc40062264"]1.2.1.3.3. Phân loại kháng nguyên dựa vào đặc tính và điều kiện kháng nguyên 17

[URL="/#_Toc40062265"]1.2.1.3.4. Điều kiện để kháng nguyên có tính miễn dich. 18

[URL="/#_Toc40062266"]1.2.1.4. Kháng thể và phản ứng kháng nguyên – kháng thể. 19

[URL="/#_Toc40062267"]1.2.1.4.1. Khái niệm kháng thể (Antibody) 19

[URL="/#_Toc40062268"]1.2.1.4.2. Cấu trúc của kháng thể. 19

[URL="/#_Toc40062269"]1.2.1.4.3. Vai trò của kháng thể. 21

[URL="/#_Toc40062270"]1.2.1.4.4.Quy lụât hình thành kháng thể dịch thể đặc hiệu. 23

[URL="/#_Toc40062271"]1.2.1.4.5. Phản ứng kháng nguyên – kháng thể. 23

[URL="/#_Toc40062272"]1.2.2. KHÁNG THỂ ĐƠN DÒNG 24

[URL="/#_Toc40062273"]1.2.2.1. Vài nét lịch sử. 24

[URL="/#_Toc40062274"]1.2.2.2. khái niệm về kháng thể đơn dòng. 25

[URL="/#_Toc40062275"]1.2.2.3. Ứng dụng của kháng thể đơn dòng. 26

[URL="/#_Toc40062276"]Chương 2: [URL="/#_Toc40062277"]VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28

[URL="/#_Toc40062278"]2.1. VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 28

[URL="/#_Toc40062279"]2.1.1. Động vật thí nghiệm 28

[URL="/#_Toc40062280"]2.1.2. Dòng tế bào ung thư tủy (Myeloma) của người 28

[URL="/#_Toc40062281"]2.1.3. Thiết bị thí nghiệm 28

[URL="/#_Toc40062282"]2.1.4. Hóa chất thí nghiệm 28

[URL="/#_Toc40062283"]2.1.5 Thời gian và địa điểm nghiên cứu. 29

[URL="/#_Toc40062284"]2.2. NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 29

[URL="/#_Toc40062285"]2.3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30

[URL="/#_Toc40062286"]2.3.1.Gây miễn dịch cho chuột 32

[URL="/#_Toc40062287"]2.3.2.Phương pháp lấy đại thực bào. 32

[URL="/#_Toc40062288"]2.3.3.Phương pháp đếm tế bào. 33

[URL="/#_Toc40062289"]2.3.3.1. Chuẩn bị Trypan blue 0,4% 33

[URL="/#_Toc40062290"]2.3.3.2. Đếm tế bào. 33

[URL="/#_Toc40062291"]2.3.4. Phương pháp lấy tế bào LymphoB của tế bào chuột 33

[URL="/#_Toc40062292"]2.3.5 Nuôi cấy tế bào Myeloma dòng Sp 2/0 và P3X 34

[URL="/#_Toc40062293"]2.3.5.1. Đánh thức và nhân nuôi tế bào Sp 2/0 và P3X 34

[URL="/#_Toc40062294"]2.3.5.2. Bảo quản tế bào trong Nito lỏng. 34

[URL="/#_Toc40062295"]2.3.6. Dung hợp Tế bào và tách dòng. 35

[URL="/#_Toc40062296"]2.3.6.1. Dung hợp. 35

[URL="/#_Toc40062297"]2.3.6.2. Tách dòng. 35

[URL="/#_Toc40062298"]2.3.7.Phương pháp ELISA 36

[URL="/#_Toc40062299"]Chương 3: [URL="/#_Toc40062300"]KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 37

[URL="/#_Toc40062301"]3.1. ĐÁNH GIÁ KẾT QUẢ GÂY ĐÁP ỨNG MIỄN DỊCH TRÊN CHUỘT BẰNG KHÁNG NGUYÊN AFP. 37

[URL="/#_Toc40062302"]3.2. KẾT QUẢ DUNG HỢP TẠO TẾ BÀO LAI SINH KHÁNG THỂ KHÁNG AFP 39

[URL="/#_Toc40062303"]3.3. KẾT QUẢ TÁCH DÒNG TẾ BÀO LAI SINH KHÁNG THỂ ĐƠN DÒNG KHÁNG AFP 43

[URL="/#_Toc40062304"]3.4. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 51

[URL="/#_Toc40062305"]3.4.1 Kết Luận. 51

[URL="/#_Toc40062306"]3.4.2 Đề Nghị 5