[FONT="]MỤC LỤC

[FONT="]

[FONT="]

CHƯƠNG TRANG

Trang tựa

Lời cảm ta i

Tóm tắt ii

Mục lục .iii

Danh sách các chữ viết tắt vi

Danh sách các hình vii

Danh sách các bảng .v iii

1. MỞ ĐẦU 1

1.1. Đặt vấn đề . . 1

1.2. Mục đích 2

1.3. Yêu cầu .

1.4. Nội dung thực hiện . 2

2. TỔNG QUAN . 3

2.1. Nấm trồng . . 3

2.1.1. Khái niệm về nấm . . 3

2.1.2. Sinh sản và chu trình sống 5

2.1.3.[FONT="]. Đặc điểm biến dưỡng và sinh lý 7

2.2. Nấm bào ngư . 8

2.2.1. Giới thiệu . 8

2.2.2. Một số loài nấm bào ngư được nuôi trồng ở VIệt Nam 9

2.2.2.1. Nấm bào ngư [FONT="]Pleurotus florida . 10

2.2.2.2. Nấm bào ngư [FONT="]Pleurotus sajor-caju 10

2.2.2.3. Nấm bào ngư[FONT="] Pleurotus pulmonarius 11

2.2.2.4. Nấm bào ngư [FONT="]Pleurotus abalonus 11

2.3. Phương pháp sắc ký . 12

2.3.1. Đặc điểm chung của phương pháp sắc ký . . 12

2.3.2. Cơ sở của phương pháp sắc ký . 12

2.4. Một số phương pháp sắc ký trong phân tich amino acid 13

2.4.1. Sắc ký giấy (Paper chromatography) . 13

2.4.2. Sắc ký lớp mỏng ( Thin layer chromatography _TLC) . 14

2.4.3.[FONT="] High Performance Liquid Chromatography (HPLC[FONT="]) . 15

2.4.3.1. Pha tĩnh . 15

2.4.3.2. Pha động . 16

2.4.3.3. Bộ dụng cụ HPLC 16

2.5. Các bước phân tích amino acid . 17

2.5.1. Quá trình thủy phân (Hydrolysis) 17

2.5.2. Quá trình tạo dẫn xuất (Derivatisation) . 19

2.5.3. Phân tách trên HPLC 20

2.5.4. Phân tích và tính toán dữ liệu . 21

2.4.4.1. Định tính . 21

2.4.4.2. Định lượng 21

2.6. Phân tích amino acid trên nấm bào ngư . 23

3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU . 23

3.1.Thời gian và địa điểm thực hiện 23

3.1.1. Thời gian thực hiện 23

3.1.2 .Địa điểm . 23

3.1.3.Vật liệu nghiên cứu . 23

3.2. Hóa chất và dụng cụ . 23

3.2.1. Hóa chất . 23

3.2.2. Dụng cụ và thiết bị . 24

3.3.[FONT="] Phương pháp nhân giống và trồng nấm 24

3.3.1. Môi trường . 24

3.3.2. Phương pháp 24

3.2.2.1. Chuẩn bị môi trường PGA . 24

3.2.2.2. Chuẩn bị môi trường hạt . 24

3.3.2.3. Chuẩn bị môi trường giá môi 25

3.2.2.4. Chuẩn bị môi trường nuôi trồng 25

3.2.2.5. Tóm tắt quy trình . 26

3.3.3. Phân tích amino acid 26

3.3.3.1.Thủy phân mẫu . 26

v

[FONT="]

3.3.3.2. Tạo dẫn xuất: . 27

3.3.3.3. Phân tích HPLC . 28

3.3.3.4. Phân tích và tính toán kết quả . 28

4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN . 29

4.1. Kết quả . 29

4.1.1. Kết quả trồng nấm 29

4.1.1.1. Sự tăng trưởng của hệ sợi trên các môi trường . 29

4.1.1.2. Sự hình thành quả thể 30

4.1.2. Kết quả phân tích amino acid . 32

5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ . 35

5.1. Kết luận . 35

5.2. Đề nghị . . 35

6. TÀI LIỆU THAM KHẢO . . 36

Phần 1. MỞ ĐẦU

1.1. Đặt vấn đề

Hiện nay, nấm bào ngư đang dần trở thành một trong những khẩu phần chính trong bữa ăn của người dân. Bên cạnh mùi vị thơm ngon, giàu dinh dưỡng, rất dễ chế biến, nấm còn được xem như là một loại “rau sạch” và có giá trị dược liệu. Sản lượng nấm bào ngư tăng lên rất nhanh trong vài thập kỷ qua. Theo thống kê của Chang và ctv (1999) chỉ trong vòng 36 năm trở lại đây tổng sản lượng nấm trồng tăng gấp 21 lần từ 350.000 năm 1965 tăng lên 7,5 triệu tấn, trong đó nấm bào ngư Pleurotus spp. tăng từ 169000 tấn năm 1986 lên 876000 tấn năm1997.

Gần đây, Việt Nam cũng đang phát triển công nghệ trồng nấm trong nước. Vì

thế, ngoài việc khai thác nấm hoang dại đem về trồng, nước ta còn nhập khẩu nhiều

loại nấm bào ngư khác từ nước ngoài như Trung Quốc, Đài Loan, Nhật Bản. Trong số

đó, có một số loài đã được biết rất rõ về thành phần dinh dưỡng, một số loài còn lại

thành phần này vẫn chưa được công bố chính thức, đặc biệt là thành phần amino acid.

Vì thế, việc xác định thành phần amino acid trên nấm bào ngư đối với Việt Nam là

điều cần thiết để có thể đánh giá giá trị sinh học, cũng như so sánh sự khác nhau giữa

chúng. Từ xưa đến nay, việc xác định amino acid đã được thực hiện trên rất nhiều

công cụ khác nhau như: sắc ký giấy, sắc ký lớp mỏng. Phân tích amino acid trên các

công cụ phân tích truyền thống này thì đòi hỏi nhiều thời gian và rất phức tạp.

Ngày nay, với sự phát triển của kỹ thuật phân tích, việc xác định thành phần amino acid trong mẫu sinh hóa đã được đơn giản hơn rất nhiều, bởi hầu hết các công cụ đã được tự động hóa và được nối trực tiếp bộ phận xử lý số liệu. Hiện nay, trên thị trường đang tồn tại rất nhiều kỹ thuật phân tích amino acid như: sắc ký lỏng cao áp, HPLC (high performance liquid chromatography), sắc ký trao đổi ion (ion exchange chromatography), điện di mao quản (capillary electrophoresis).

Trong phạm vi cho phép, chúng tôi chỉ thực hiện “Phân tích amino acid bằng sắc ký lỏng cao áp” trên một số loài nấm đang có ở thị trường Việt Nam. Từ đó, với kết quả thu được chúng tôi sẽ tiến hành so sánh với các đối tượng khác cũng như sự khác nhau giữa chúng và dữ liệu về thành phần amino acid của từng loài nấm bào ngư sẽ được lưu lại để làm cơ sở cho những nghiên cứu sau này.

1.2. Mục đích

So sánh sự thành phần amino acid giữa các loài nấm bào ngư đang có trên thị trường Việt Nam. Khi đó, chúng tôi sẽ chọn ra một loài phù hợp để so sánh thành phần amino acid khi trồng trên các cơ chất khác nhau

1.3. Yêu cầu

Tạo đựợc mẫu có độ tinh sạch cao.

Tránh hiện tượng làm thay đổi tính chất mẫu như oxy hóa, halogen hóa, hay làm mẫu bị hủy hoàn toàn trong quá trình thủy phân.

Sử dụng thiết bị HPLC (high performance liquid chromatography) của Trung

tâm Phân Tích Hóa Lý để phân tích thành phần amino acid của các loài nấm kể trên

1.4. Nội dung thực hiện

Thu thập và nhân giống các loài nấm đang có trên thị trường.

Nuôi trồng các loài nấm này trên môi trường mùn cưa có bổ sung một số vi lượng. Tiến hành thu quả thể

Xác định thành phần amino acid trên các loài nấm bào ngư bằng sắc ký lỏng cao áp (HPLC).