Tìm tài liệu

Tinh che protein tai to hop gnrh tbk o e Coli

Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli

Upload bởi: tunglamsd

Mã tài liệu: 235021

Số trang: 89

Định dạng: doc

Dung lượng file: 337 Kb

Chuyên mục: Công nghệ thực phẩm

Info

TINH CHẾ PROTEIN TÁI TỔ HỢP GNRH-TBK Ở E. COLI

Đặng Thành Nam & Phan Văn Chi

Viện Công nghệ Sinh học, Trung tâm KHTN & CNQG

1. ĐẶT VẤN ĐỀ

GnRH-TBK là một “độc tố miễn dịch” tái tổ hợp (Recombinant Immunotoxin-IT) được tạo ra nhờ sự kết hợp giữa thành phần hướng đích là hormon giải phóng kích dục tố (Gonadotropin Reseasing Hormon-GnRH) và thành phần độc tố là một protein bất hoạt ribosom lớp 1 Trichobakin[1, 2], nhằm tiêu diệt một cách chọn lọc các dòng tế bào bộc lộ GnRH receptor bề mặt đặc hiệu.

TBK được tách chiết từ cây Trichosanthes sp. Bac Kan, có hoạt tính N-glycosidase, có khả năng nhận biết và phân cắt đặc hiệu gốc adenin ở vị trí 4324 của ARN ribosom 28S dẫn đến ức chế quá trình tổng hợp protein và gây chết tế bào [3, 4]. GnRH là một neurodecapeptid, có ái lực cao (Kd khoảng 10-9 M) với các GnRH receptor (GnRHR) và không gây đáp ứng miễn dịch. GnRHR đã được phát hiện thấy nhiều trên bề mặt tế bào thuộc các mô ung thư vú, tử cung, tuyến tiền liệt, tuyến tuỵ[5-9]. Hơn nữa GnRH cũng đã được sử dụng làm thành phần hướng đích trong một số độc tố miễn dịch tái tổ hợp như recombinant GnRH-PAP fusion toxin. Trong đó PAP là cũng là một protein bất hoạt ribosom được tách chiết từ cây Phytolacca americana. GnRH-PAP đã có khả năng ức chế đặc hiệu một số dòng tế bào ung thư có biểu hiện các GnRHR bề mặt.

Tiếp nối những nghiên cứu về thiết kế vector biểu hiện gen mã hoá cho protein lai GnRH-TBK ở E.coli , trong bài này chúng tôi giới thiệu về các điều kiện biểu hiện và kết quả tinh chế loại protein tái tổ hợp này.

2. NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Nguyên liệu

Vector biểu hiện pGnRH-TBK mang gen mã hoá cho protein lai GnRH-TBK được thiết kế tại Phòng Hoá sinh Protein, Viện Công nghệ Sinh học, Hà Nội . Để nghiên cứu biểu hiện có sử dụng tế bào E. coli chủng BL21(DE3), môi trường Luria-Bertani(LB), isopropylthio-b-D-galactoside(IPTG), ampicillin và các hoá chất thông thường khác.

2.2 Phương pháp nghiên cứu

2.2.1 Điện di SDS-PAGE

Điện di biến tính protein bằng SDS-PAGE (12,5%) được tiến hành theo các phương pháp của Laemmli .

2.2.2 Sắc kí trao đổi ion trên hệ FPLC

Sau khi biểu hiện, sinh khối tế bào được thu lại và phá bằng siêu âm trong đệm 50 mM Tris-HCL pH 7,0 có chứa 20 mM EDTA, Triton X-100 0,1%, lysozyme 100mg/ml. Huyền dich tế bào sau khi phá được ly tâm ở 12 000 vòng/phút trong 20 phút, để tách riêng phần cặn và nổi. Phần nổi được nạp thẳng vào cột CM- Sepharose(XK- 16/20). Protein mang điện tích trái dấu sẽ được giữ trên cột, còn các protein khác bị rửa trôi khỏi cột bằng đệm Tris-HCL pH 7,0. Cột được tiếp tục rửa cho đến khi A280 nm trở lại đường nền. Mẫu được thôi ra khỏi cột bằng gradien nồng độ 0,0-0,4 M NaCl nhờ chương trình phần mềm trên hệ FPLC (Pharmacia-Biotech).

2.2.3 Western blotting và phân tích trình tự đầu N của protein tái tổ hợp

Các phương pháp Western blotting và xác định trình tự các axit amin đầu N theo nguyên lý Edman được tiến hành như đã mô tả

Phần bên dưới chỉ hiển thị một số trang ngẫu nhiên trong tài liệu. Bạn tải về để xem được bản đầy đủ

  • Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli
  • Đang tải dữ liệu ...
  • Đang tải dữ liệu ...
  • Đang tải dữ liệu ...
  • Đang tải dữ liệu ...
  • Đang tải dữ liệu ...
  • Đang tải dữ liệu ...
  • Đang tải dữ liệu ...
  • Đang tải dữ liệu ...
  • Đang tải dữ liệu ...
  • Đang tải dữ liệu ...
  • Đang tải dữ liệu ...
  • Đang tải dữ liệu ...
  • Đang tải dữ liệu ...
  • Đang tải dữ liệu ...
  • Đang tải dữ liệu ...
  • Đang tải dữ liệu ...
  • Đang tải dữ liệu ...
  • Đang tải dữ liệu ...
  • Đang tải dữ liệu ...
  • Đang tải dữ liệu ...
  • Đang tải dữ liệu ...
  • Đang tải dữ liệu ...
  • Đang tải dữ liệu ...
  • Đang tải dữ liệu ...
  • Đang tải dữ liệu ...
  • Đang tải dữ liệu ...
  • Đang tải dữ liệu ...
  • Đang tải dữ liệu ...
  • Đang tải dữ liệu ...
  • Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli
  • Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli
  • Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli
  • Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli
  • Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli
  • Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli
  • Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli
  • Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli
  • Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli
  • Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli
  • Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli
  • Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli
  • Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli
  • Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli
  • Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli
  • Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli
  • Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli
  • Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli
  • Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli
  • Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli
  • Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli
  • Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli
  • Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli
  • Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli
  • Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli
  • Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli
  • Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli
  • Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli
  • Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli
  • Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli

GỢI Ý

Những tài liệu gần giống với tài liệu bạn đang xem

Nghiên cứu biểu hiện gen Trehalase tái tổ ...

Upload: ngongay36

📎 Số trang: 57
👁 Lượt xem: 429
Lượt tải: 16

Tìm hiểu về đặc tính biểu hiện cao Lipase ...

Upload: loinoi_lam_nhoi_dau

📎 Số trang: 3
👁 Lượt xem: 291
Lượt tải: 16

Thiết kế vector và bước đầu biểu hiện ...

Upload: loki_4987

📎 Số trang: 46
👁 Lượt xem: 536
Lượt tải: 16

Khảo sát khả năng sinh axít lactic và tính ...

Upload: cadusa2003

📎 Số trang: 60
👁 Lượt xem: 562
Lượt tải: 19

Thử nghiệm điều chế auto vaccine phõng bệnh ...

Upload: nhcuong1970

📎 Số trang: 81
👁 Lượt xem: 819
Lượt tải: 16

Các phương pháp phát hiện E Coli trong thực ...

Upload: cabinet001

📎 Số trang: 47
👁 Lượt xem: 836
Lượt tải: 18

Ứng dụng kỹ thuật PCR trong việc phát hiện ...

Upload: nganguyen116

📎
👁 Lượt xem: 431
Lượt tải: 17

Sinh tổng hợp Protein

Upload: vobo40

📎 Số trang: 9
👁 Lượt xem: 509
Lượt tải: 22

Bệnh phù đầu ở lợn con do escherichia coli ...

Upload: loihoihan_muonmangdk

📎 Số trang: 27
👁 Lượt xem: 763
Lượt tải: 18

HOÀN THIỆN QUY TRÌNH BIẾN NẠP ĐOẠN DNA VÀO ...

Upload: ngocbyd

📎 Số trang: 68
👁 Lượt xem: 837
Lượt tải: 18

Hoàn thiện quy trình biến nạp đoạn dna vào ...

Upload: ceruwind_Cross

📎 Số trang: 23
👁 Lượt xem: 593
Lượt tải: 16

Phân lập vi khuẩn bacillus subtilis từ đất ...

Upload: acc_dm2000

📎 Số trang: 73
👁 Lượt xem: 613
Lượt tải: 16

QUAN TÂM

Những tài liệu bạn đã xem

Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli

Upload: tunglamsd

📎 Số trang: 89
👁 Lượt xem: 635
Lượt tải: 17

CHUYÊN MỤC

Kỹ thuật - Công nghệ Công nghệ thực phẩm
Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli TINH CHẾ PROTEIN TÁI TỔ HỢP GNRH-TBK Ở E. COLI Đặng Thành Nam & Phan Văn Chi Viện Công nghệ Sinh học, Trung tâm KHTN & CNQG 1. ĐẶT VẤN ĐỀ GnRH-TBK là một “độc tố miễn dịch” tái tổ hợp (Recombinant Immunotoxin-IT) được tạo ra nhờ sự kết hợp giữa doc Đăng bởi
5 stars - 235021 reviews
Thông tin tài liệu 89 trang Đăng bởi: tunglamsd - 05/08/2025 Ngôn ngữ: Việt nam, English
5 stars - "Tài liệu tốt" by , Written on 05/08/2025 Tôi thấy tài liệu này rất chất lượng, đã giúp ích cho tôi rất nhiều. Chia sẻ thông tin với tôi nếu bạn quan tâm đến tài liệu: Tinh chế protein tái tổ hợp gnrh tbk ở e Coli