Đề tài: Nghiên cứu biểu hiện gen Trehalase tái tổ hợp ở E.coli và xác định các tính chất của enzyme

MỤC LỤC

MỞ ĐẦU

PHẦN 1:TỔNG QUAN TÀI LIỆU

I.1 Công nghệ DNA tái tổ hợp

I.2 Đại cương về vi khuẩn E.coli

I.2.1 Đặc điểm hình thái

I.2.2 Đặc tính nuôi cấy

I.2.3 Đặc tính sinh hóa

I.2.4 Sức đề kháng của E.coli

I.3. Tình hình sản xuất và ứng dụng enzyme trên thế giới và Việt Nam

I.3.1 Tình hình sản xuất và ứng dụng enzyme trên thế giới

I.3.2 Tình hình sản xuất và ứng dụng enzyme ở Việt Nam

I.4 Trehalase

I.4.1 Giới thiệu về enzyme Trehalase

I.4.2 Trehalase trong vi khuẩn

I.4.3 Trehalase trong thực vật

I.4.4 Trehalase trong nấm men

I.4.5 Thủy phân Trehalose

I.5. Tổng quan về đường chức năng Trehalose

I.5.1 Trehalose

I.5.2 Ảnh hưởng của Trehalose lên cơ thể sống

I.5.2.1 Ảnh hưởng của Trehalose đến sự chuyển hóa hydratcacbon

I.5.2.2 Vai trò thúc đẩy quá trình hấp thụ canxi của Trehalose

I.5.2.3 Ảnh hưởng của Trehalose đến hệ vi sinh vật trong khoang miệng

I.5.2.4 Tính kháng khuẩn của Trehalose

I.5.2.5 Tính an toàn của Trehalose

I.6 Ứng dụng của Trehalose

I.7 Tình hình nghiên cứu và sản xuất Trehalose trên thế giới

I.8. Tình hình nghiên cứu và sản xuất Trehalose ở Việt Nam

PHẦN 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

II.1 Nguyên vật liệu và hóa chất

II.1.1 Giống vi sinh vật

II.1.2 Plasmid

II.1.3 Hóa chất

II.1.4 Máy móc và thiết bị

II.2 Phương pháp nghiên cứu

II.2.1 Biến nạp E.coli DH5 alpha bằng phương pháp sốc nhiệt

II.2.2 Tách DNA plasmid

II.2.3 Xác định DNA biểu hiện ở E.coli trên gel Agarose

II.2.4 Phương pháp phá vỡ tế bào

II.2.5 Xác định hàm lượng protein tổng bằng phương pháp Bradford

II.2.6 Xác định hoạt tính enzyme bằng phương pháp DNS (3.5 Dinitro – Salicylic)

II.2.7 Tách và tinh chế enzyme bằng sắc ký cột Ni – NTA

II.2.8 Phân tích protein bằng điện di trên gel SDS – polyacrylamide (SDS-PAGE)

II.2.9 Xác định sản phẩm thủy phân bằng phương pháp sắc ký bản mỏng (Thin layer chromatography – TLC)

PHẦN 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

III.1 Kết quả biến nạp gen Trehalase vào E.coli DH-5 alpha

III.2 Kết quả tách plasmid DNA và điện di trên gel agarose

III.3 Xác định các tính chất của enzyme

III.4 Tinh chế Trehalase bằng cột sắc kí Ni – NTA

III.5 Xác định một số tính chất của Trehalase

III.5.1 Ảnh hưởng của nhiệt độ tới hoạt lực của enzyme

III.5.2 Ảnh hưởng của pH và dung dịch đệm lên hoạt động của Enzyme

III.5.3 Khả năng chịu nhiệt của Trehalase

III.6. Ảnh hưởng của ion kim loại và dung môi hữu cơ lên hoạt độ của enzyme

III.6.1 Ảnh hưởng của ion kim loại lên hoạt độ của enzyme

III.6.2 Ảnh hưởng của dung môi hữu cơ lên hoạt độ của enzyme

III.7 Xác định sản phẩm sinh tổng hợp trehalose bằng enzyme tái tổ hợp (Thin layer chromatography – TLC)

KẾT LUẬN

TÀI LIỆU THAM KHẢ