1. MỞ ĐẦU .1

1.1. ĐẶT VẤN ĐỀ . 1

1.2. MỤC ĐÍCH, YÊU CẦU . 2

1.2.1. Mục đích 2

1.2.2. Yêu cầu 2

2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3

2.1. ĐÁP ỨNG MIỄN DỊCH . 3

2.1.1. Khái niệm miễn dịch 3

2.1.2. Kháng nguyên 3

2.1.2.1. Định nghĩa 3

2.1.2.2. Khái niệm về epitop . 3

2.1.3. Kháng thể dịch thể . 4

2.1.3.1. Định nghĩa . 4

2.1.3.2. Cấu trúc của một phân tử immunoglobulin . 4

2.1.4. Các yếu tố ảnh hưởng đến khả năng đáp ứng miễn dịch của động vật 5

2.1.4.1. Loài động vật . 5

2.1.4.2. Yếu tố di truyền 5

2.1.4.3. Kháng nguyên . 6

2.1.4.4. Qui trình gây miễn dịch . 7

2.1.4.5. Chất bổ trợ . 8

2.1.5. Cơ chế đáp ứng miễn dịch dịch thể 9

2.1.5.1. Các tế bào tham gia đáp ứng miễn dịch dịch thể . 9

2.1.5.2. Cơ chế hình thành đáp ứng miễn dịch dịch thể . 11

2.2. VI KHUẨN E. coli 14

2.2.1. Định nghĩa 14

2.2.2. Đặc tính sinh hóa 14

2.2.3. Yếu tố kháng nguyên . 14

2.2.3.1. Kháng nguyên thân O 14

2.2.3.2. Kháng nguyên bề mặt hay kháng nguyên vỏ K 15

2.2.3.3. Kháng nguyên lông roi H . 15

2.3. TÁCH KHÁNG THỂ BẰNG AMMONIUM SULFATE 15

2.4. HỒI CHẾ KHÁNG THỂ BẰNG PHưƠNG PHÁP THẨM TÍCH 16

2.5. PHẢN ỨNG KHÁNG NGUYÊN – KHÁNG THỂ 17

2.5.1. Các lực liên kết kháng nguyên – kháng thể (KN-KT) . 17

2.5.2. Các đặc tính chung của sự liên kết KN-KT . 17

2.5.3. Phản ứng ngưng kết KN-KT 18

2.5.3.1. Phản ứng ngưng kết KN-KT xảy ra theo 2 pha . 18

2.5.3.2. Các yếu tố ảnh hưởng đến phản ứng ngưng kết KN-KT 19

2.6. PROTEIN A 19

3. NỘI DUNG VÀ PHưƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM 21

3.1. THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM 21

3.1.1. Thời gian thực nghiệm . 21

3.1.2. Địa điểm . 21

3.2. NỘI DUNG NGHIÊN CỨU . 21

3.3. VẬT LIỆU THÍ NGHIỆM 21

3.4. PHưƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU . 22

3.4.1. Gây đáp ứng miễn dịch trên thỏ . 22

3.4.1.1. Chuẩn bị dịch tiêm 22

3.4.1.2. Tiêm thú thí nghiệm . 22

3.4.1.3. Bố trí thí nghiệm . 23

3.4.2. Thu nhận kháng huyết thanh 25

3.4.2.1. Tách kháng thể bằng amonium sulfate bão hoà 26

3.4.2.2. Phục hồi kháng thể . 26

3.4.3. Xử lí kháng huyết thanh . 27

3.4.3.1. Hấp phụ kháng thể không đặc hiệu .28

3.4.3.2. Gắn kháng thể với protein A của Staphylococcus aureus .29

3.4.4. Đánh giá . 30

3.4.4.1. Định tính (bằng phản ứng ngưng kết nhanh trên phiến kính) .30

3.4.4.2. Định lượng (định hiệu giá bằng phản ứng ngưng kết chậm trong

ống nghiệm) 31

3.5. CHỈ TIÊU THEO DÕI .32

3.6. XỬ LÍ KẾT QUẢ 32

4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .33

4.1. KẾT QUẢ .33

4.1.1. Định tính 33

4.1.1.1. Qui trình ngắn ngày 33

4.1.1.2. Qui trình dài ngày 34

4.1.2. Định lượng . 34

4.1.2.1. Qui trình ngắn ngày .35

4.1.2.2. Qui trình dài ngày 36

4.1.2.3. Hiệu quả gây đáp ứng miễn dịch ở 2 qui trình 37

4.1.3. Xử lí tăng độ nhạy của kháng huyết thanh . 38

4.1.3.1. Xác định nồng độ S. aureus thích hợp gắn với kháng huyết thanh .38

4.1.3.2. Kiểm tra phản ứng ngưng kết với kháng huyết thanh xử lí gắn

S. aureus 38

4.1.4. Xử lí tăng độ đặc hiệu của kháng huyết thanh . 40

4.2. THẢO LUẬN .42

4.2.1. Định tính 42

4.2.2. Định lượng . 43

4.2.2.1. Qui trình ngắn ngày .43

4.2.2.2. Qui trình dài ngày .43

4.2.3. Xử lí để tăng độ nhạy kháng huyết thanh 44

4.2.4. Xử lí tăng độ đặc hiệu của kháng huyết thanh . 44

5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ .46

5.1. KẾT LUẬN 46

5.2. ĐỀ NGHỊ 46

6. TÀI LIỆU THAM KHẢO 47

7. PHỤ LỤC .49