Chƣơng 1: MỞ ĐẦU 1

1.1. Đặt vấn đề 1

1.2. Mục đích đề tài 2

1.3. Yêu cầu đề tài 2

Chƣơng 2: TỔNG QUAN 3

2.1. Sơ lược về vi khuẩn Bacillus subtilis 3

2.1.1. Lịch sử phát hiện 3

2.1.2. Đặc điểm phân loại và sự phân bố của vi khuẩn Bacillus subtilis 3

2.1.3. Đặc điểm hình thái 4

2.1.4. Đặc điểm nuôi cấy 4

2.1.5. Đặc điểm sinh hoá 5

2.1.6. Bào tử và khả năng tạo bào tử của vi khuẩn Bacillus subtilis 6

2.1.6.1. Cấu tạo bào tử 6

2.1.6.2. Khả năng tạo bào tử 6

2.1.7. Tính chất đối kháng 6

2.2. Giới thiệu về enzyme amylase và enzyme protease 7

2.3.1. Enzyme amylase 7

2.3.1.1. Lịch sử nghiên cứu 7

2.3.1.2. Vi sinh vật tạo amylase 7

2.3.1.3. Đặc tính của amylase 8

2.3.1.4. Sinh tổng hợp amylase ở vi sinh vật 10

2.3.1.5. Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình sinh tổng hợp amylase 10

2.3.1.6. Ứng dụng amylase vi sinh vật 11

2.3.2. Enzyme protease 11

2.3.2.1. Nguồn thu nhận enzyme protease 11

2.3.2.2. Đặc điểm và tính chất của protease vi sinh vật 12

2.3.2.3. Chức năng sinh học của protease vi sinh vật 13

2.3.2.4. Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình sinh tổng hợp protease của vi sinh vật 14

2.3.2.5. Ứng dụng protease vi sinh vật 14

2.3. Giới thiệu về probiotic15

2.4.1. Định nghĩa 15

2.4.2. Chức năng sinh học 15

2.4.3. Một số chế phẩm probiotic thông dụng 15

2.4. Tình hình nghiên cứu và ứng dụng chế phẩm có vi khuẩn Bacillus subtilis 16

Chƣơng 3: NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18

3.1. Thời gian và địa điểm thực hiện đề tài 18

3.1.1. Thời gian 18

3.1.2. Địa điểm 18

3.2. Vật liệu thí nghiệm 18

3.2.1. Đối tượng khảo sát 18

3.2.2. Thiết bị và dụng cụ thí nghiệm 18

3.2.2.1. Thiết bị 18

3.2.2.2. Dụng cụ: 18

3.3. Nội dung nghiên cứu 19

3.4. Phương pháp thực hiện đề tài 19

3.4.1. Phân lập vi khuẩn Bacillus subtilis từ đất 19

3.4.1.1. Cách lấy mẫu đất để phân lập vi khuẩn 19

3.4.1.2. Phương pháp phân lập vi khuẩn Bacillus subtilis19

3.4.1.3. Khảo sát đặc điểm sinh học của vi khuẩn phân lập được 20

3.4.2. Các thí nghiệm về vi khuẩn Bacillus subtilis 21

3.4.2.1. Ảnh hưởng của chế độ sục khí và thời gian nuôi cấy đến khả năng sinh enzyme của vi khuẩn Bacillus subtilis 21

3.4.2.2. Ảnh hưởng của môi trường đến hoạt độ enzyme của vi khuẩn Bacillus subtilis 22

3.4.2.3. Khảo sát điều kiện (pH, thời gian) thích hợp cho sự sản xuất enzyme của các chủng Bacillus subtilis. 23

3.4.3. Thử nghiệm thời gian và nhiệt độ bảo quản chế phẩm từ Bacillus subtilis 25

3.4.3.1. Quy trình thực hiện 25

3.4.3.2. Kiểm tra chế phẩm trong thời gian bảo quản 25

Chƣơng 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 26

4.1. Khảo sát đặc điểm của vi khuẩn Bacillus subtilis 26

4.1.1. Quan sát đặc điểm khuẩn lạc nghi ngờ là Bacillus subtilis 26

4.1.2. Đặc điểm hình thái của vi khuẩn nghi ngờ là Bacillus subtilis 26

4.1.3. Khảo sát đặc điểm sinh hóa 27

4.2. Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng của chế độ sục khí và thời gian nuôi cấy đến khả năng sinh enzyme amylase và protease của các chủng vi khuẩn. 29

4.3. Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng của môi trường đến hoạt độ enzyme của vi khuẩn Bacillus subtilis 31

4.4. Khảo sát điều kiện (pH, thời gian) thích hợp cho sản xuất enzyme của các chủng Bacillus subtilis 33

4.5. Khảo sát thời gian và nhiệt độ bảo quản chế phẩm sau khi sản xuất 34

Chƣơng 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 36

5.1. Kết luận 36

5.2. Đề nghị 36

PHỤ LỤC 4