Chƣơng 1. MỞ ĐẦU 1

1.1 Đặt vấn đề 1

1.2 Mục tiêu và nội dung nghiên cứu 2

1.2.1 Mục tiêu 2

1.2.2 Nội dung nghiên cứu 2

Chƣơng 2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

2.1 Giới thiệu về bệnh lúa von 3

2.1.1 Phân bố và thiệt hại 3

2.1.2 Triệu chứng 3

2.1.3 Tác nhân 5

2.1.4 Hình dạng và kích thước 6

2.1.5 Đặc tính sinh lý 6

2.1.6 Điều kiện phát sinh và phát triển 7

2.2 Đại cương về nấm Gibberella fujikuroi 8

2.2.1 Phân loại học 8

2.2.2 Sơ lược về Gibberella fujikuroi 8

2.2.3 Sinh tổng hợp giberelin ở Gibberella fujikuroi 9

2.3 Giới thiệu về gen tef 10

2.4 Tổng quát về giberelins 11

2.4.1 Đại cương về các chất giberelins 11

2.4.2 Chức năng và vai trò sinh hóa 13

2.4.2.1 GAs kích thích sự phát triển thân ở những cây lùn và cây hoa thị 13

2.4.2.2 GAs điều hòa sự chuyển hóa cây con sang giai đọan trưởng thành 14

2.4.2.3 GAs ảnh hưởng giai đọan bắt đầu ra hoa và sự xác định giới tính 14

2.4.2.4 GAs đẩy mạnh “fruit set” 14

2.4.2.5 GAs thúc đẩy sự nảy mầm của hạt 14

2.4.3 Ứng dụng GAs trong thương mại 15

2.4.3.1 Trong trồng trọt 15

2.4.3.2 Sản xuất bia 15

2.4.3.3 Tăng sản lượng mía 15

2.4.3.4 Sử dụng trong chọn giống thực vật 16

2.5 Sắc ký lớp mỏng 16

2.5.1 Tổng quát về sắc ký lớp mỏng 16

2.5.2 Ưu điểm của sắc ký lớp mỏng 20

2.5.3 Một số ứng dụng thông thường của TLC 20

2.6 Ứng dụng của kỹ thuật PCR20

Chƣơng 3. VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM 21

3.1 Thời gian và địa điểm thực hiện 22

3.1.1 Thời gian nghiên cứu 22

3.1.2 Địa điểm thực hiện 22

3.2 Vật liệu nghiên cứu 23

3.3 Vật liệu và phương pháp thí nghiệm 23

3.3.1 Phân lập, tách đơn bào tử và thu sinh khối nấm 23

3.3.1.1 Dụng cụ và hóa chất thí nghiệm 24

3.3.1.2 Phương pháp phân lập nấm 25

3.3.1.3 Phương pháp cắt đơn bào tử 25

3.3.1.4 Phương pháp nhân sinh khối 25

3.3.2 Phương pháp ly trích DNA của nấm 26

3.3.2.1 Hóa chất và dụng cụ thí nghiệm 26

3.3.2.2 Phương pháp ly trích DNA 26

3.3.2.3 Định tính DNA 27

3.3.2.4 Tinh sạch sản phẩm ly trích 28

3.3.3 Khuếch đại vùng tef 28

3.3.3.1 Hóa chất và dụng cụ thí nghiệm 28

3.3.3.2 Thực hiện phản ứng 29

3.3.3.3 Đánh giá sản phẩm PCR 29

3.4 Sắc ký lớp mỏng (TLC) phát hiện GA3 29

3.4.1 Hóa chất và dụng cụ thí nghiệm 29

3.4.2 Phương pháp sản xuất GA3 30

3.4.3 Phương pháp trích GA3 30

3.4.4 Định tính GA3 bằng TLC 31

Chƣơng 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 32

4.1 Kết quả thu mẫu bệnh lúa von ở ĐBSCL 32

4.2 Kết quả phân lập và tách đơn bào tử 33

4.3 Kết quả nhân sinh khối 35

4.4 Kết quả ly trích và tinh sạch DNA của nấm 36

4.5 Kết quả PCR 38

4.6 Kết quả định tính GA3 bằng TLC 39

Chƣơng 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 41

5.1 Kết luận 41

5.2 Đề nghị 41

TÀI LIỆU THAM KHẢO 42

PHỤ LỤ