Mục Lục

1. MỞ ĐẦU . 1

1.1. Đặt vấn đề . 2

1.2. Mục tiêu – nội dung – yêu cầu đề tài

2 2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

2.1.Giới thiệu tổng quan về giống lan rừng Dendrobium 3

2.1.1. Đặc điểm hình thái . 3

2.1.2. Các nhóm lan Dendrobium 5

2.1.3. Đặc điểm của 10 giống lan nghiên cứu trong đề tài 6

2.2. Quy trình li trích DNA ở tế bào thực vật 8

2.3. Giới thiệu về kỹ thuật PCR . 11

2.3.1. Nguyên tắc của kỹ thuật PCR 11

2.3.2. Thành phần thực hiện một phản ứng PCR 14

2.3.2.1. Mẫu . 14

2.3.2.2. Primer . 14

2.3.2.3. dNTP . 16

2.3.2.4. MgCl2 . 17

2.3.2.5. Taq 17

2.3.5.6. Buffer 17

2.4. Đa dạng di truyền – một số phương pháp nghiên cứu đa dạng di truyền 18

2.4.1. Đa dạng di truyền 18

2.4.2. Một số phương pháp nghiên cứu đa dạng di truyền 18

2.4.2.1. Phương pháp chỉ thị hình thái . 18

2.4.2.2. Phương pháp chỉ thị isozyme . 19

2.4.2.3. Phương pháp dùng chỉ thị phân tử 19

2.5. Đánh giá sự đa dạng di truyền bằng phần mềm NTSYSpc và Winboot 26

2.5.1. NTSYSpc version 2.1 26

2.5.2. Winboot . 28

2.6. Các công trình nghiên cứu có liên quan . 29

2.6.1. Tình hình nghiên cứu trong nước 29

2.6.2. Tình hình nghiên cứu ngoài nước 31

3. VẬT LIỆU VÀ PHưƠNG PHÁP TIẾN HÀNH 32

3.1. Nội dung, thời gian và địa điểm . 32

3.1.1. Nội dung 32

3.1.2 Thời gian và địa điểm nghiên cứu. . 32

3.2. Vật liệu 32

3.2.1. Các giống lan Dendrobium thí nghiệm . 32

3.2.2. Thiết bị - dụng cụ . 34

3.2.3 Hóa chất thí nghiệm 34

3.3. Đối tượng và phương pháp nghiên cứu 36

3.3.1. Đối tượng nghiên cứu 36

3.3.2. Phương pháp nghiên cứu . 36

4. KẾT QUẢ - THẢO LUẬN . 45

4.1. Điều tra và thu thập các giống lan rừng Dendrobium từ Thành phố Hồ Chí Minh và rừng Nam Cát Tiên dựa trên đặc điểm hình thái 45

4.2. Tối ưu phương pháp ly trích DNA tổng số từ mẫu lá tươi cho độ tinh sạch và ổn định cao . 48 4.3. Xây dựng quy trình PCR dựa trên kỹ thuật RAPD cho tính đa hình cao 53

4.4. Phân tích sự đa dạng di truyền của 10 giống lan rừng Dendrobium dựa trên 30 primer RAPD 54

4.5. Phân tích sự đa dạng di truyền của 10 giống lan rừng Dendrobium bằng phần mềm NTSYSpc version 2.1 và Winboot

5. KẾT LUẬN - ĐỀ NGHỊ 69

5.1. Kết luận . 69

5.2. Đề nghị 70

TÀI LIỆU THAM KHẢO . 71

PHỤ LỤ