TÓM TẮT KHÓA LUẬN

Đề tài được tiến hành từ ngày 14-02-2005 đến ngày 06-07-2005 tại Trung Tâm Phân Tích Thí Nghiệm Trường Đại Học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh.

Đối tượng được nghiên cứu trong đề tài là ba giống bò ta Vàng, lai Sind và sữa Hà Lan. Đây là những giống bò được nuôi phổ biến nhất ở Việt Nam và mang lại nguồn lợi lớn cho ngành chăn nuôi. Do đó chúng tôi sử dụng phương pháp multiplex PCR để xác định giới tính của chúng nhằm ứng dụng phương pháp này trong xác định giới tính của phôi ở các giống bò sau này.

Kết quả đạt được như sau:

1. Ly trích được 54 mẫu DNA từ cơ vân và 10 mẫu DNA từ lông đuôi của ba giống bò. Trong đó, DNA từ cơ (tỷ số OD trung bình 1,76) tinh sạch và có hàm lượng cao hơn DNA từ lông (1,49), thấp nhất từ ngọn lông (1,22).

2. Trong hai chu trình nhiệt của phản ứng PCR được thử nghiệm, chu trình nhiệt I cho hiệu quả xác định giới tính kém hơn chu trình nhiệt II (0% so với 100%) khi tiến hành trên giống ta Vàng. Chu trình nhiệt I có thời gian ngắn hơn chu trình nhiệt II

3. Taq polymerase có nguồn gốc từ hãng ABgene và Bio-rad cho hiệu quả xác định giới tính cao hơn Taq có nguồn gốc từ hãng Promega (100% so với 0%) khi thí nghiệm trên giống ta Vàng.

4. Qui trình PCR với chu trình nhiệt I và Taq ABgene 1,5 UI có thể xác định giới tính trên ba giống ta Vàng, lai Sind và sữa Hà Lan với tỷ lệ thành công 100%.

5. 11 mẫu DNA cơ làm khô theo mức độ I cho hiệu quả PCR cao hơn 11 mẫu DNA cơ làm khô theo mức độ II (100% so với 20%).

6. Tỷ lệ thành công trong xác định giới tính bằng PCR trên 10 mẫu DNA lông thấp hơn rất nhiều so với tỷ lệ thành công trên 32 mẫu DNA cơ (20% so với 100%).

MỤC LỤC

NỘI DUNG TRANG

Bìa i

Trang tựa ii

Lời cảm tạ iii

Tóm tắt khóa luận iv

Mục lục v

Danh sách các chữ viết tắt vii

Danh sách các bảng viii

Danh sách các hình và biểu đồ ix

PHẦN I. MỞ ĐẦU 1

1.1 Đặt vấn đề 1

1.2 Mục tiêu và yêu cầu 2

1.2.1 Mục tiêu 2

1.2.2 Yêu cầu 2

PHẦN II. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

2.1 Khái quát về nguồn mẫu chiết xuất DNA 3

2.1.1 Đặc điểm về ngoại hình các giống bò 3

2.1.2 Đặc điểm về nguồn mô chiết xuất DNA 3

2.1.2.1 Một vài đặc điểm về cơ bò 3

2.1.2.2 Một vài đặc điểm về lông bò 3

2.2 Cơ sở xác định giới tính 4

2.2.1 Lịch sử khám phá cơ chế xác định giới tính tự nhiên ở động vật 4

2.2.2 Sơ lược về NST giới tính 5

2.2.2.1 Các gen trên NST Y 6

2.2.2.2 Các gen trên NST X 8

2.3 Các phương pháp xác định giới tính 9

2.3.1 Kiểm tra hoạt động enzyme liên kết NST 9

2.3.2 Phản ứng miễn dịch đối với kháng nguyên chuyên biệt giới tính 10

2.3.3 Phân tích di truyền tế bào để xác định giới tính 11

2.3.4 Sử dụng đoạn dò DNA chuyên biệt NST Y để phân biệt giới tính phôi 11

2.3.5 Phân biệt giới tính bằng kỹ thuật polymerase chain reaction (PCR) 12

2.3.5.1 Cơ sở phản ứng PCR dùng để phân biệt giới tính 12

2.3.5.2 Một số công trình xác định giới tính bằng PCR 13

PHẦN III. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15

3.1 Nội dung nghiên cứu 15

3.2 Thời gian và địa điểm tiến hành 15

3.3 Vật liệu 15

3.3.1 Nguồn mẫu chiết xuất DNA 15

3.3.2 Đoạn mồi 15

3.4 Phương pháp tiến hành 16

3.4.1 Lấy và bảo quản mẫu 16

3.4.2 Ly trích DNA 16

3.4.2.1 Ly trích DNA từ cơ 16

3.4.2.2 Ly trích DNA từ lông 18

3.4.3 Multiplex PCR xác định giới tính 19

3.4.3.1 Xây dựng qui trình PCR xác định giới tính bò 19

3.4.3.2 Áp dụng qui trình PCR để xác định giới tính bò 20

3.4.4 Điện di và quan sát sản phẩm PCR 20

3.4.4.1 Chuẩn bị gel agarose 1,5% 21

3.4.4.2 Điện di sản phẩm PCR 21

3.5 Xử lý số liệu 21

PHẦN IV. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 22

4.1 Ly trích DNA 22

4.1.1 So sánh DNA ly trích từ cơ thu hồi theo hai mức độ làm khô 22

4.1.2 So sánh DNA ly trích từ cơ và lông 22

4.1.3 Kết quả ly trích DNA từ gốc lông và ngọn lông 23

4.2 PCR xác định giới tính 25

4.2.1 Kết quả xây dựng qui trình PCR 25

4.2.1.1 So sánh hai chu trình nhiệt 25

4.2.1.2 Thử nghiệm ba loại Taq 26

4.2.2 Áp dụng qui trình PCR 28

4.2.2.1 Xác định giới tính của ba giống bò với DNA từ cơ 28

4.2.2.2 Kết quả PCR với DNA từ cơ được phơi khô theo hai mức độ 29

4.2.2.3 So sánh kết quả PCR trên DNA của cơ và lông 30

PHẦN V. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 32

5.1 Kết luận 32

5.2 Đề nghị 32

TÀI LIỆU THAM KHẢO 33

PHỤ LỤC 36

XÁC ĐỊNH GIỚI TÍNH BẰNG KỸ THUẬT MULTIPLEX PCR TRÊN BA GIỐNG BÒ