MỤC LỤC

LỜI CẢM TẠ . iii

TÓM TẮT .iv

MỤC LỤC .vi

DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT .ix

DANH SÁCH CÁC BẢNG .x

DANH SÁCH CÁC HÌNH .xi

CHưƠNG 1: MỞ ĐẦU .1

1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ 1

1.2 MỤC TIÊU – YÊU CẦU .2

1.2.1 Mục tiêu .2

1.2.2 Yêu cầu 2

1.3 GIỚI HẠN ĐỀ TÀI 3

CHưƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 4

2.1 GIỚI THIỆU TỔNG QUÁT VỀ CÂY CAO SU .4

2.1.1 Nguồn gốc và phân bố tự nhiên .4

2.1.2 Sự phân bố và sản xuất cao su trên thế giới 4

2.1.3 Đặc điểm sinh học của cây cao su .5

2.1.4 Một số đặc điểm di truyền của cây cao su .8

2.1.5 Quá trình cải tiến giống cao su 9

2.2 NGUYÊN TẮC VÀ ỨNG DỤNG CỦA MỘT SỐ PHưƠNG PHÁP DÙNG

TRONG NGHIÊN CỨU DI TRUYỀN PHÂN TỬ .11

2.2.1 Chỉ thị hình thái .11

2.2.2 Chỉ thị isozyme 11

2.2.3 Chỉ thị DNA 12

2.2.3.1 Kỹ Thuật RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphisms) 12

2.2.3.2 Kỹ thuật SSCP (Single – Strand Conformation Polymorphism) 12

2.2.3.3 Kỹ thuật STS (Sequence - Tagged Sites) .13

2.2.3.4 Kỹ thuật Microsatellites (SSR – Simple Sequences Repeat) .13

2.2.3.5 Kỹ thuật AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism) 13

2.2.3.6 Kỹ thuật RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) .14

2.2.4 Kỹ thuật PCR (Polymerase Chain Reaction) 14

2.3 ỨNG DỤNG KỸ THUẬT RAPD TRONG NGHIÊN CỨU CÂY CAO SU19

CHưƠNG 3: VẬT LIỆU VÀ PHưƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .21

3.1 VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU .21

3.1.1 Vật liệu di truyền .21

3.1.2 Hóa chất thí nghiệm .21

3.1.2.1 Hoá chất ly trích DNA 21

3.1.2.2 Hóa chất sử dụng trong kỹ thuật RAPD .21

3.1.3 Thiết bị, dụng cụ thí nghiệm .22

3.2 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU .22

3.2.1 Thời gian nghiên cứu .22

3.2.2 Địa điểm nghiên cứu .22

3.3 PHưƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22

3.3.1 Phương pháp lấy mẫu và ly trích DNA .22

3.3.2 Phương pháp kiểm tra hàm lượng và độ tinh sạch của DNA mẫu 23

3.3.3 Phương pháp khuếch đại DNA 24

3.3.4 Phương pháp điện di sản phẩm DNA sau khi khuếch đại .24

3.3.5 Phương pháp phân tích kết quả .24

CHưƠNG 4: KẾT QUẢ - THẢO LUẬN .25

4.1 LY TRÍCH DNA 25

4.1.1 Định tính DNA mẫu bằng phương pháp điện di trên gel agarose .25

4.1.2 Định lượng DNA mẫu bằng phương pháp đo mật độ quang (Optical

Density) 26

4.2 KHUẾCH ĐẠI DNA BẰNG KỸ THUẬT RAPD 26

4.3 ĐIỆN DI TRÊN GEL AGAROSE .27

4.4 ĐÁNH GIÁ SỰ ĐA HÌNH CỦA CÁC PRIMER .29

4.5 ĐÁNH GIÁ BIẾN LưỢNG DI TRUYỀN CỦA CÁC CON LAI 29

4.6 PHÂN NHÓM DI TRUYỀN CÁC CON LAI .34

CHưƠNG 5: KẾT LUẬN – ĐỀ NGHỊ .37

5.1 KẾT LUẬN 37

5.2 ĐỀ NGHỊ .38

TÀI LIỆU THAM KHẢO 39

PHỤ LỤC .43

DANH SÁCH CÁC BẢNG

BẢNG TRANG

Bảng 4.1: Tỷ lệ và nồng độ các hóa chất tham gia phản ứng RAPD .27

Bảng 4.2: Chu trình nhiệt cho phản ứng RAPD .27

Bảng 4.3: Số băng DNA được khuếch đại ở các primer 29

Bảng 4.4: Số băng DNA được khuếch đại của các con lai nghiên cứu .30

Bảng 4.5: Hệ số tương đồng di truyền của các con lai nghiên cứu 31

Bảng 4.6: Hệ số tương đồng di truyền giữa các con lai với mẹ (PB260) và bố

(RO44/268) của chúng. 32

Bảng 4.7: Các băng DNA chỉ xuất hiện ở bố và các con lai 33

Bảng 4.8: Các băng DNA chỉ xuất hiện ở mẹ và các con lai 33

Bảng 4.9: Phân nhóm thành tích sinh trưởng và sản lượng của các con lai .35

DANH SÁCH CÁC HÌNH

HÌNH TRANG

Hình 2.1: Mô tả phản ứng PCR . 16

Hình 4.1: DNA của các dòng vô tính cao su trên gel agarose 1% 25

Hình 4.2-A: Băng DNA của các con lai được khuếch đại với primer A18 28

Hình 4.2-B: Băng DNA của các con lai được khuếch đại với primer OPB12 .28

Hình 4.2-C: Băng DNA của các con lai còn lại được khuếch đại với cả 2 primer

.29

Hình 4.3: Cây phân nhóm di truyền của các con lai được thiết lập dựa trên cơ sở dữ

liệu phân tích RAPD, sử dụng phương pháp phân tích cluster UPGMA .36

x