iv

TÓM TẮT

Các kỹ thuật hỗ trợ sinh sản như IVM, IVF, IVD đã trở nên phổ biến trên thế giới.

Đã có nhiều nghiên cứu trên các đối tượng heo, bò, cừu, chuột đạt được những

thành tựu đáng kể. Trên chó, các kỹ thuật này còn nhiều hạn chế do cơ chế trưởng

thành của noãn có nhiều khác biệt so với các loài động vật khác. Do đó, kỹ thuật

nuôi noãn chín cần được hoàn thiện, làm nền tảng cho các nghiên cứu kế tiếp. Đề

tài được thực hiện và đạt được những kết quả sau:

Chó nhỏ hơn 5 tháng tuổi không thể cung cấp noãn cho IVM. Số noãn lấy

được trên mỗi chó cái ở giai đoạn này là 2,31 noãn, chất lượng noãn cũng

không ổn định. Chỉ nên lấy noãn của chó đã trên 5 tháng tuổi. Ở độ tuổi

này, tỉ lệ noãn lấy được trên mỗi chó cái là 25,38 noãn.

Tỉ lệ IVM thành công 0.75% trên buồng trứng lấy ở giai đoạn 1(chó vừa bị

đập chết). Buồng trứng ở giai đoạn 2 và 3 trong quy trình giết mổ (sau khi

thui lửa gas) không thể dùng cho IVM.

Theo giai đoạn sinh sản, buồng trứng ở giai đoạn có xoang nang là nguồn

cung cấp noãn dồi dào nhất cho IVM(42,41 noãn/chó). Noãn cũng đạt được

hình thái tốt nhất ở giai đoạn này. Ngược lại, chó ở giai đoạn nuôi con là có

số noãn thấp nhất(9,8 noãn/chó), có lẽ do prolactin đã ức chế sự phát triển

của nang noãn. Số noãn thu được trên các giai đoạn còn lại là: thể vàng

(13.63), nghỉ ngơi (14,2) và mang thai (15,88).

vi

MỤC LỤC

CHưƠNG TRANG

Trang tựa

Lời cảm ơn iii

Tóm tắt iv

Sumary v

Mục lục .vi

Danh mục các chữ viết tắt .ix

Danh mục các bảng .x

Danh mục các biểu đồ .x

Danh mục các hình xi

1. MỞ ĐẦU

1.1. Đặt vấn đề .1

1.2. Mục tiêu 1

1.3. Yêu cầu .1

2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU

2.1. Cấu tạo và chức năng của hệ sinh dục của chó cái .3

2.1.1. Buồng trứng .3

2.1.2. Ống dẫn trứng 3

2.1.3. Tử cung 4

2.1.4. Cổ tử cung 4

2.1.5 Âm đạo 4

2.2. Quá trình trưởng thành và phát triển của tế bào trứng .5

2.2.1. Quá trình trưởng thành của nang noãn 5

2.2.2. Nội tiết của nang tăng trưởng 6

2.2.3. Sự trưởng thành của noãn 6

2.2.3.1. Trưởng thành nhân 6

2.2.3.2.Trưởng thành tế bào chất 7

vii

2.3. IVM (In vitro maturation) 7

2.3.1. Lịch sử IVM .7

2.3.2. Hệ thống môi trường sử dụng trong nuôi noãn chó in vitro 7

2.3.2.1. Môi trường nang noãn .7

2.3.2.2. Môi trường giọt. 8

2.3.2.3. Môi trường tế bào một lớp. .8

2.3.2.4. Môi trường ống dẫn trứng tách biệt 9

2.3.3. Môi trường sinh hóa cho sự trưởng thành in vitro của noãn chó .10

2.3.3.1. Môi trường nuôi cấy 10

2.3.3.1. Các chất bổ sung vào môi trường 10

2.3.4. Các yếu tố ảnh hưởng đến IVM .11

2.3.4.1. Thời gian 11

2.3.4.2. Chất lượng noãn và kích thước nang noãn 12

2.3.4.3. Tuổi và tình trạng sinh dục chó cái .12

2.3.4.4. Nồng độ oxy và nhiệt độ 12

3. VẬT LIỆU VÀ PHưƠNG PHÁP

3.1. Thời gian và địa điểm thực hiện .13

3.2. Nội dung khảo sát .13

3.3. Vật liệu .13

3.3.1. Vật liệu .13

3.3.2. Hóa chất .13

3.3.2.1 Môi trường nuôi noãn .13

3.3.2.1 Môi trường rửa noãn PBS-PVA. 13

3.3.2.1 Các hóa chất nhuộm noãn. .14

3.3.3. Thiết bị .14

3.3.4. Dụng cụ 14

3.4. Phương pháp tiến hành .15

3.4.1. Thu nhận buồng trứng tại lò mổ 15

3.4.1.1 Xác định tuổi chó .15

viii

3.4.1.2 Thao tác mổ buồng trứng 17

3.4.1.3 Thu nhận buồng trứng 17

3.4.2. Tìm và rửa noãn .19

3.4.3. Nuôi noãn .19

3.4.4 Thu nhận noãn sau khi nuôi 20

3.4.5. Đánh giá phân loại noãn 20

3.4.6. Nhuộm noãn 21

3.5. Xử lý thống kê 22

4. KẾT QUẢ THẢO LUẬN

4.1. Thí nghiệm 1: ảnh hưởng của tuổi chó đến số lượng noãn thu được .23

4.2. Thí nghiện 2: ảnh hưởng của nhiệt độ bên trong xoang bụng chó lên chất

lượng và sự chín của noãn 23

4.2.1. Đặc điểm hình thái của buồng trứng 24

4.2.2. Đặc điểm hình thái của noãn .24

4.2.3. Kết quả IVM 25

4.3. Ảnh hưởng của chu kỳ động dục lên chất lượng và số lượng noãn thu

hoạch 27

4.4. Kinh nghiệm trong IVM .28

5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ

5.1. Kết luận 30

5.2. Đề nghị .30

6. TÀI LIỆU THAM KHẢO

7. PHỤ LỤ