MỞ ĐẦU

Vi sinh vật trong tự nhiên rất phong phú và đa dạng. Chúng ở xung

quanh ta: trong đất, trong nước, không khí thậm chí cả trong cơ thể con

người. Chúng có thể gây cho ta cả những bất lợi khôn lường như những

bệnh lao, dịch hạch, dịch tả, đại dịch cúm ở người và gia cầm, lở mồm,

long móng ở bò lợn . nhưng chúng cũng có thể đem lại cho chúng ta nguồn

lợi vô cùng to lớn nếu ta biết, hiểu chúng và biết sử dụng chúng vào mục

đích sẽ giúp cho cuộc sống con người tốt đẹp hơn.

Từ thời xa xưa, con người đã biết ứng dụng những hoạt tính có lợi

của vi sinh vật phục vụ cho đời sống của mình như tạo ra các loại rượu quý

nhờ quá trình lên men của vi sinh vật, những bài thuốc chữa bệnh từ vi sinh

vật .

Ngày nay chúng ta đang sống ở thế kỷ 21, thế kỷ của khoa học kỹ

thuật thì công nghệ sinh học và đặc biệt là công nghệ vi sinh càng chứng tỏ

ưu thế của mình.

Hiện nay đã có rất nhiều chất có hoạt tính sinh học khác nhau đã

được tổng hợp từ vi sinh vật đã được đưa vào sản xuất ở mức độ công

nghiệp để phục vụ cho nghiên cứu, công - nông nghiệp, y học và đời sống

của con người.

Các chủng vi khuẩn như: Bacillus, Lactobacillus đã và đang được

sử dụng trong các chế phẩm sinh học để phục vụ cho các ngành sản xuất

như: rượu, bia, công nghiệp dệt, thuộc da, y học, bổ sung vào thức ăn gia

súc, thức ăn trong nuôi trồng thủy sản, phân hủy thức ăn thừa của tôm, phế

thải hữu cơ làm sạch môi trường nuôi trồng thủy sản . là nhờ khả năng sinh

enzyme thủy phân amylaza, proteaza, xenlulaza của chúng.

Xuất phát từ thực tế đó chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề tài:

”Nghiên cứu tuyển chọn một số chủng vi khuẩn Bacillus có hoạt tính

enzyme proteaza kiềm”. Với các nội dung sau:

1. Phân lập từ đất vườn qua trung gian là cỏ khô và khoai tây để chọn

các chủng Bacillus.

2. Nghiên cứu các đặc điểm về hình thái tế bào khuẩn lạc, nghiên

cứu một số đặc điểm sinh lý, sinh hóa của các chủng đã được tuyển chọn.

3. Nghiên cứu các điều kiện nuôi cấy để thu sinh khối có hoạt tính

cao.

Đề tài được thực hiện tại phòng Vi sinh vật của Viện Sinh học Nông

nghiệp thuộc trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội.

MỤC LỤC

Trang

Phần I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

1.1. Đại cương về Bacillus .4

1.2. Protease .10

1.2.1. Tính chất, đặc điểm của protease 10

1.2.2. Ứng dụng của protease 12

1.2.3. Tình hình nghiên cứu và ứng dụng protease trong sản xuất ở Việt

Nam .15

Phần II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .16

2.1 Đối tượng – Vật liệu .17

2.1.1. Đối tượng .17

2.1.2. Vật liệu .17

2.1.2.1.Thiết bị .17

2.1.3. Môi trường nuôi cấy vi sinh vật 18

2.1.3.1. Môi trường NA (dùng để phân lập, giữ giống và nuôi cấy)

(g/l): 18

2.1.3.2. Môi trường thử hoạt tính amylase, protease 18

2.1.3.3. Cách chuẩn bị môi trường 19

2.2. Các phương pháp nghiên cứu 19

2.2.1. Phương pháp phân lập 19

2.2.2. Phương pháp giữ giống cấy chuyển 19

2.2.3. Một số phương pháp nghiên cứu đặc điểm sinh học của vi khuẩn .20

2.2.3.1. Phương pháp quan sát đặc điểm khuẩn lạc .20

2.2.3.2. Phương pháp làm tiêu bản tế bào sống .20

2.2.3.3. Phương pháp nhuộm Gram .21

2.2.3.4. Phương pháp xác định sự hình thành bào tử .22

2.2.4. Phương pháp xác định hoạt tính Catalase 22

2.2.5. Xác định mật độ tế bào bằng phương pháp đo mật độ quang

(OD620nm ) .22

2.2.6. Nghiên cứu khả năng thủy phân tinh bột, protein 23

2.2.7. Nghiên cứu ảnh hưởng của các nguồn nguyên liệu khác nhau lên

khả năng sinh trưởng và sinh tổng hợp enzyme của các chủng Bs, Bm,

BM .24

2.2.8. Nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ oxy hòa tan lên khả năng sinh

trưởng của các chủng Bs, Bm, BM .25

Phần III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 26

3.1. Phân lập chủng Bacillus 27

3.2. Đặc điểm hình thái khuẩn lạc .27

3.3. Đặc điểm hình thái tế bào 28

3.4. Nghiên cứu hoạt tính Catalase .30

3.5. Nghiên cứu khả năng sinh enzym thuỷ phân tinh bột, protein của ba

chủng Bs, Bm và BM .31

3.6. Nghiên cứu quá trình sinh trưởng của các chủng Bs, Bm và BM trên

môi trường không có chất cảm ứng 33

3.7 Nghiên cứu quá trình sinh trưởng và sinh enzmy amylaza của 3

chủng vi khuẩn Bs, Bm và BM trên môi trường có chất cảm ứng là tinh

bột tan 34

3.7.1. Nghiên cứu quá trình sinh trưởng của 3 chủng vi khuẩn Bs, Bm và

BM trên môi trường có chất cảm ứng là tinh bột tan .34

3.7.2. Nghiên cứu quá trình sinh enzyme của 3 chủng vi khuẩn Bs, Bm

và BM trên môi trường có chất cảm ứng là tinh bột tan 35

3.8 Nghiên cứu quá trình sinh trưởng và sinh enzmy proteaza của 3 chủng

vi khuẩn Bs, Bm và BM trên môi trường có chất cảm ứng là cazein .37

3.8.1. Nghiên cứu quá trình sinh trưởng của 3 chủng vi khuẩn Bs, Bm và

BM trên môi trường có chất cảm ứng là cazein 37

3.8.2. Nghiên cứu quá trình sinh enzyme proteaza của 3 chủng vi khuẩn

Bs, Bm và BM trên môi trường có chất cảm ứng là cazein .39

3.9. Nghiên cứu quá trình sinh trưởng và sinh enzyme của các chủng Bs,

Bm, BM trên môi trường có bổ sung CaCO3 .41

3.9.1. Nghiên cứu nuôi vi khuẩn trong môi trường có CaCO3 thu

amylaza 41

3.9.2. Nghiên cứu nuôi vi khuẩn trong môi trường có CaCO3 thu

proteaza 44

3.10. Ảnh hưởng của nồng độ oxy hòa tan .47

3.11. Nghiên cứu ảnh hưởng của pH tới sự sinh trưởng và phát triển của

ba chủng nghiên cứu .50

3.12. Nghiên cứu sử dụng bột đậu tương làm nguồn nguyên liệu thay thế 51

3.13. Nghiên cứu đồ thị tổng hợp động học của quá trình lên men 54

Phần IV KẾT LUẬN .56

TÀI LIỆU THAM KHẢO .5