Mục Lục

Chương 1 : MỞ ĐẦU .

1 1.1 Đặt vấn đề .

1 1.2 Mục tiêu .

2 1.3 Yêu cầu . 2

Chương 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

2.1 Buồng trứng 3

2.1.1 Vị trí, hình thái 3

2.1.2 Cấu tạo . 3

2.1.3 Chức năng . 3

2.2 Nang noãn 4

2.2.1 Đặc điểm hình thái 4

2.2.2 Sự phát triển của nang noãn 4

2.2.3 Nội tiết nang tăng trưởng 6

2.2.4 Sự trưởng thành của nang noãn . 7

2.2.4.1 Trưởng thành nhân 7

2.2.4.2 Trưởng thành tế bào chất 8

2.2.5 Sự rụng trứng 9

2.3 Nuôi chín trứng trong ống nghiệm (In vitro maturation - IVM) 9

2.3.1 Lịch sử IVM 9

2.3.2 Môi trường IVM 10

2.3.2.1 Các loại môi trường IVM . 10

2.3.2.2 Thành phần trong môi trường IVM 10

2.3.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến kết quả IVM . 12

2.3.3.1 Thời gian . 12

2.3.3.2 Chất lượng noãn và kích thước nang noãn . 13

2.3.3.3 Tuổi và tình trạng sinh dục chó cái . 13

2.3.3.4 Thời gian và nhiệt độ bảo quản mẫu buồng trứng 13

2.4 Phó tinh hoàn . 13

2.5 Tinh trùng 15

2.5.1 Nguồn gốc và hình dạng . 15

2.5.2 Quá trình sinh tinh . 16

2.5.3 Cấu tạo . 16

2.5.4 Thành phần 17

2.5.5 Đặc tính sinh lý . 17

2.5.6 Các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt động của tinh trùng . 18

2.6 Thụ tinh trong ống nghiệm (in vitro fertilization-IVF) 19

2.6.1 Lịch sử IVF . 19

2.6.2 Cơ chế của sự thụ tinh . 20

2.6.3 Các giai đoạn phát triển của phôi 21

2.6.4 Vật liệu cho IVF . 22

2.6.4.1 Giao tử 22

2.6.4.2 Môi trường IVF . 22

2.6.5 Các hệ thống thụ tinh in vitro 23

2.6.6 Đánh giá kết quả thụ tinh . 24

2.6.7 Các yếu tố ảnh hưởng đến IVF . 25

Chương 3: VẬT LIỆU PHưƠNG PHÁP 26

3.1 Thời gian và địa điểm tiến hành 26

3.2 Nội dung nghiên cứu . 26

3.3 Vật liệu . 26

3.3.1 Nguồn mẫu 26

3.3.2 Hóa chất . 27

3.3.2.1 Hóa chất dùng cho trứng . 27

3.3.2.2 Hóa chất dùng cho tinh trùng 29

3.3.2.3 Hóa chất dùng cho thụ tinh . 30

3.3.3 Dụng cụ - thiết bị . 31

3.3.3.1 Dụng cụ . 31

3.3.3.2 Thiết bị 31

3.4 Bố trí thí nghiệm . 32

3.4.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát nồng độ β-mercaptoethanol sử dụng để nuôi chín trứng 32

3.4.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát nồng độ orcein phù hợp cho quy trình nhuộm trứng . 32

3.4.3 Thí nghiệm 3: So sánh hiệu quả thụ tinh trong môi trường Fert-TALP và TYH 32

3.5 Phương pháp tiến hành 33

3.5.1 Thu nhận buồng trứng tại lò mổ 33

3.5.2 Xử lý buồng trứng . 35

3.5.3 Tìm và rửa trứng . 35

3.5.4 Phân loại trứng trước khi nuôi 35

3.5.5 Nuôi trứng . 36

3.5.6 Thu nhận và đánh giá trứng sau khi nuôi 36

3.5.6.1 Thu nhận trứng sau khi nuôi . 36

3.5.6.2 Đánh giá trứng sau khi nuôi 37

3.5.7 Nhuộm trứng . 38

3.5.8 Thu nhận tinh hoàn tại lò mổ 39

3.5.9 Thu tinh trùng và hoạt hóa tinh trùng . 39

3.5.9.1 Quy trình thu nhận và hoạt hóa tinh trùng 39

3.5.9.2 Các chỉ tiêu đánh giá tinh trùng trong thụ tinh in vitro: . 39

3.5.10 Phương pháp thụ tinh 40

3.5.10.1 Thụ tinh bằng môi trường Fert-TALP 41

3.5.10.2 Thụ tinh bằng môi trường TYH 42

3.6 Xử lý số liệu 42

Chương 4: KẾT QUẢ THẢO LUẬN 43

4.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát hiệu quả nuôi trứng khi bổ sung các nồng độ β-mercaptoethanol . 43

4.2 Thí nghiệm 2 : Khảo sát nồng độ orcein phù hợp cho quy trình nhuộm trứng 44

4.3 Thí nghiệm 3 : So sánh hiệu quả thụ tinh trong môi trường TYH và Fert - TALP . 47

4.4 Một số kinh nghiệm trong IVF . 48

4.4.1 Lấy mẫu . 48

4.4.2 Thao tác trong phòng thí nghiệm . 49

Chương 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ . 50

5.1 Kết luận 50

5.2 Đề nghị . 5