MỤC LỤC

Chƣơng 1 1

MỞ ĐẦU 1

1.1 Đặt vấn đề 1

1.2 Mục đích 2

1.3 Yêu cầu 3

Chƣơng 2 4

TỔNG QUAN TÀI LIỆU 4

2.1 Sự trao đổi thông tin di truyền ở vi khuẩn 4

2.1.1 Giới thiệu 4

2.1.2 Những cơ chế chuyển gene ở vi khuẩn 4

2.1.2.1 Biến nạp (transformation) 4

2.1.2.2 Tải nạp (transduction) 5

2.1.2.3 Tiếp hợp (conjugation) 7

2.1.3 Những yếu tố di truyền có khả năng chuyển vị (transposable genetic element_TGE) 10

2.1.3.1 Đặc tính của những yếu tố di truyền có khả năng chuyển vị 11

2.1.3.2 Các loại yếu tố di truyền có khả năng chuyển vị 11

2.2 Plasmid 13

2.3 Các phƣơng pháp thƣờng dùng để chuyển DNA plasmid 15

2.3.1 Phƣơng pháp tiếp hợp ba thành phần (triparental mating) 15

2.3.2 Phƣơng pháp điện biến nạp 16

2.3.2.1 Phƣơng pháp 16

2.3.3 Phƣơng pháp Calcium chloride18

2.5 Phòng trừ sinh học bệnh cây và tác nhân phòng trừ sinh học 19

2.5.1 Vi khuẩn Pseudomonas fluorescens 20

2.5.1.1 Phân loại vi khuẩn Pseudomonas fluorescens 20

2.5.1.2 Các nghiên cứu về vi khuẩn Pseudomonas fluorescens 21

2.6 Protein GFP 24

2.6.1 Cấu trúc và đặc điểm 24

2.6.2 Tình hình nghiên cứu về gene gfp 25

Chƣơng 3 28

VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28

3.1 Thời gian và địa điểm thực hiện 28

3.2 Vật liệu và hóa chất, dụng cụ thí nghiệm 28

3.2.1 Vật liệu 28

3.2.1.1 Vi khuẩn E.coli DH5α (λ-pir) chứa plasmid pUT-gfp 28

3.2.1.2 Vi khuẩn E.coli DH5α (λ-pir) chứa plasmid pRK600 29

3.2.1.3 Vi khuẩn Pseudomonas fluorescens 29

3.2.2 Các loại môi trƣờng dùng trong nuôi cấy vi khuẩn 31

3.2.3 Các loại dụng cụ, thiết bị dùng trong nghiên cứu 31

3.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 31

Chƣơng 4 34

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 34

4.1 Kết quả 34

4.1.1 Kết quả kiểm tra tính kháng kháng sinh của vi khuẩn 34

4.1.2 Kết quả kiểm tra khả năng phát sáng trên môi trƣờng KB 36

4.1.3 Kết quả khảo sát các điều kiện tối ƣu để chuyển gene gfp vào vi khuẩn Pseudomonas fluorescens bằng phƣơng pháp tiếp hợp ba thành phần 37

4.1.3.1 Khảo sát ảnh hƣởng của thời gian nuôi cấy tăng sinh vi khuẩn 37

4.1.3.2 Khảo sát ảnh hƣởng của mật độ vi khuẩn 38

4.1.3.3 Khảo sát ảnh hƣởng của nhiệt độ khi nuôi chung trên môi trƣờng KB 39

4.1.3.4 Kết quả đối chứng 40

4.2 Thảo luận 41

4.2.1 Các thông số tối ƣu cho quá trình tiếp hợp 41

4.2.2 Cơ chế quá trình tiếp hợp ba thành phần 41

4.2.3 Môi trƣờng tối ƣu cho chọn lọc 43

4.2.4 Kết quả đối chứng 42

4.2.5 Quy trình tiếp hợp tối ƣu cho dòng vi khuẩn nhận Pseudomonas fluorescens 1.8 44

Chƣơng 5 47

KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 47

5.1 Kết luận 47

5.2 Đề nghị 47

TÀI LIỆU THAM KHẢO 48

PHỤ LỤC 5