1. MỞ ĐẦU 1

1.1. ĐẶT VẤN ĐỀ 1

1.2 MỤC TIÊU VÀ YÊU CẦU 1

2.TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2

2.1 VACXIN 2

2.1.1 Lịch sử ra đời vacxin 2

2.1.2 Đáp ứng miễn dịch 2

2.1.2.1Kháng nguyên 2

2.1.2.2 Kháng thể 3

2.1.2.3 Cơ chế đáp ứng miễn dịch 4

2.1.2.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến đáp ứng miễn dịch 7

2.1.3 Phân loại 9

2.1.3.1 Vacxin sống 9

2.1.2.2 Vacxin vô hoạt 10

2.1.2.3 Vacxin phân tử 10

2.2 BỆNH PHÙ VÀ ĐỘC TỐ VT2e 12

2.2 PROTEIN TÁI TỔ HỢP MBP-VT2eB 14

2.3 PHƯƠNG PHÁP OUCHTERLONY 14

2.3.1 Nguyên tắc 14

2.3.2 Định tính kháng nguyên- kháng thể bằng phương pháp khuyếch tán trên thạch 16

2.4 PHẢN ỨNG TRUNG HÒA ĐỘC TỐ VEROTOXIN TRÊN TẾ BÀO VERO 16

2.4.1 Sơ lược về tế bào Vero 16

2.4.2 Nguyên tắc phản ứng trung hòa độc tố 17

2.4.3 Đánh giá hiệu quả vacxin bệnh phù bằng phương pháp trung hoà độc tố verotoxin trên môi trường nuôi cấy tế bào vero 17

3. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP TIẾN HÀNH 18

3.1 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM 18

3.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 18

3.3 VẬT LIỆU THÍ NGHIỆM 18

3.3.1 Sinh vật thí nghiệm 18

3.3.2 Hóa chất thí nghiệm 18

3.3.3 Dụng cụ thí nghiệm 19

3.4 PHƯƠNG PHÁP 20

3.4.1 Bố trí thí nghiệm 20

3.4.2 Cách pha dịch tiêm 20

3.4.3 Lấy máu 20

3.4.4 Định tính kháng thể bằng phương pháp Ouchterlony 21

3.4.5 Xác định liều TCID50 22

3.4.5.1Chuẩn bị dịch độc tố 22

3.4.5.2Chuẩn bị tế bào vero 22

3.4.5.3Xác định liều TCID50 23

3.4.6 Thực hiện phản ứng trung hòa độc tố 25

3.5 Các chỉ tiêu theo dõi 26

4.KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27

4.1 CÁC TRIỆU CHỨNG CỦA HEO SAU KHI TIÊM VACXIN 27

4.2 HIỆU GIÁ KHÁNG HUYẾT THANH THEO PHƯƠNG PHÁP KẾT TỦA KHUYẾCH TÁN TRÊN THẠCH 27

4.2.1 Với kháng nguyên là độc tố của E. coli H28 27

4.2.2 Với kháng nguyên MBP-VT2eB 28

4.3 LIỀU TCID50 CỦA DỊCH LỌC VI KHUẨN 27

4.4 HIỆU GIÁ KHÁNG HUYẾT THANH TRÊN MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY TẾ BÀO 30

4.4.1 Đối với mẫu huyết thanh có sodium azid chưa bất hoạt 30

4.4.2 Đối với mẫu huyết thanh có sodium azid và có bất hoạt 31

4.4.3 Thí nghiệm chứng minh sodium azid gây chết tế bào vero 33

4.4.3.1 Mẫu huyết thanh có sodium azid 33

4.4.3.1 Đối với mẫu không có sodium azid 33

4.4.4 Đối với mẫu huyết thanh không có sodium azid và có bất hoạt 33

5.KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 36

5.1 KẾT LUẬN 36

5.2 ĐỀ NGHỊ 36

6.TÀI LIỆU THAM KHẢO 38

7.PHỤ LỤC 3