1. MỞ ĐẦU 1

1.1. Đặt vấn đề 1

1.2. Mục đích 2

1.3. Yêu cầu 2

2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

2.1. Lịch sử nghiên cứu và phát triển kỹ thuật nuôi cấy tế bào động vật 3

2.2. Đặc điểm tế bào động vật – nguồn nguyên liệu cho nuôi cấy tế bào 5

2.2.1. Sự điều hòa trao đổi chất 6

2.2.2. Tính chất cơ học yếu 7

2.2.3. Khả năng phân chia và tốc độ tăng trƣởng rất chậm 7

2.2.4. Cần giá đỡ trong quá trình phát triển và nhân đôi 8

2.2.5. Chịu ảnh hƣởng rất mạnh bởi sản phẩm trao đổi chất của chúng 8

2.2.6. Khả năng tiếp nhận gene lạ 8

2.2.7. Khả năng bảo quản trong điều kiện nhân tạo 8

2.3. Tổng quan về nuôi cấy tế bào động vật 9

2.3.1. Nuôi cấy sơ cấp 9

2.3.2. Sự cấy chuyển 9

2.3.3. Hệ thống nuôi cấy tế bào10

2.3.3.1. Nuôi cấy lớp đơn 10

2.3.3.2. Nuôi cấy huyền phù 10

2.3.4. Các loại tế bào trong nuôi cấy tế bào động vật 11

2.3.5. Những đặc điểm chức năng của tế bào nuôi cấy12

2.3.6. Điều kiện thích hợp cho nuôi cấy tế bào động vật

2.3.7. Vấn đề cần lƣu ý khi nuôi cấy tế bào động vật 19

2.3.8. Các pha của sự nuôi cấy tế bào động vật 19

2.3.8.1. Pha ức chế 19

2.3.8.2. Pha phát triển 19

2.3.8.3. Pha ổn định 20

2.3.8.4. Pha suy giảm 20

2.4. Bảo quản lạnh tế bào nuôi cấy

2.4.1. Những ƣu điểm của việc đông lạnh tế bào nuôi cấy 20

2.4.2. Tiến trình bảo quản lạnh tế bào

2.4.3. Một số vấn đề có thể ảnh hƣởng đến kết quả bảo quản 22

2.5. Ứng dụng của nuôi cấy tế bào động vật 22

2.5.1. Thiết lập hệ thống mô hình 23

2.5.2. Xét nghiệm độc tế bào

2.5.3. Nghiên cứu ung thƣ 23

2.5.4. Virus học 23

2.5.5. Sản xuất các chất thứ cấp từ tế bào 23

2.5.6. Chẩn đoán di truyền 24

2.5.7. Kỹ thuật di truyền 24

2.5.8. Liệu pháp gene 25

2.5.9. Phát triển và chọn lọc thuốc 25

3. NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.1. Thời gian và địa điểm 26

3.1.1. Thời gian 26

3.1.2. Địa điểm 26

3.2. Vật liệu và hóa chất 26

3.2.1. Đối tƣợng 26

3.2.2. Thiết bị và dụng cụ thí nghiệm 26

3.2.3. Các hóa chất và môi trƣờng 27

3.3. Nội dung nghiên cứu 27

3.4. Phƣơng pháp nghiên cứu 28

3.4.1. Kỹ thuật lấy phôi và tách mô ở phôi gà 28

3.4.2. Phƣơng pháp tạo tế bào sơ cấp28

3.4.3. Phƣơng pháp đếm tế bào bằng buồng đếm Neubauer 29

3.4.4. Phƣơng pháp cấy chuyền tế bào30

3.4.5. Phƣơng pháp bảo quản tế bào 31

3.4.6. Phƣơng pháp hồi phục tế bào 31

3.5. Chỉ tiêu theo dõi 31

3.6. Phƣơng pháp xử lý số liệu 31

3.7. Quy trình tiến hành thí nghiệm 32

4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

4.1. Xác định tuổi phôi và phƣơng pháp tách tế bào thích hợp 33

4.2.Thời gian tế bào sơ cấp phát triển đầy một lớp 35

4.3. Cấy chuyển, thu hoạch, bảo quản tế bào và khảo sát khả năng sống của tế bào sau bảo quản 37

4.3.1. Thời gian phát triển đầy một lớp của tế bào thứ cấp 37

4.3.2.Xác định khả năng sống của tế bào sau bảo quản 39

4.4. Quy trình điều chế tế bào xơ phôi gà trong điều kiện Việt Nam 41

5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 43

6. TÀI LIỆU THAM KHẢO 44

7. PHỤ LỤC