MỤC LỤC

Chương 1 . 1

MỞ ĐẦU . 1

1.1 Đặt vấn đề .1

1.2 Mục đích .2

1.3 Yêu cầu .3

Chương 2 .4

TỔNG QUAN TÀI LIỆU 4

2.1 Sự trao đổi thông tin di truyền ở vi khuẩn .4

2.1.1 Giới thiệu .4

2.1.2 Những cơ chế chuyển gene ở vi khuẩn 4

2.1.2.1 Biến nạp (transformation) 4

2.1.2.2 Tải nạp (transduction) 5

2.1.2.3 Tiếp hợp (conjugation) 7

2.1.3 Những yếu tố di truyền có khả năng chuyển vị (transposable genetic

element_TGE) 10

2.1.3.1 Đặc tính của những yếu tố di truyền có khả năng chuyển vị . 11

2.1.3.2 Các loại yếu tố di truyền có khả năng chuyển vị . 11

2.2 Plasmid .13

2.3 Các phương pháp thường dùng để chuyển DNA plasmid .15

2.3.1 Phương pháp tiếp hợp ba thành phần (triparental mating) 15

2.3.2 Phương pháp điện biến nạp 16

2.3.2.1 Phương pháp 16

2.3.3 Phương pháp Calcium chloride 18

2.5 Phòng trừ sinh học bệnh cây và tác nhân phòng trừ sinh học 19

2.5.1 Vi khuẩn Pseudomonas fluorescens 20

2.5.1.1 Phân loại vi khuẩn Pseudomonas fluorescens .20

2.5.1.2 Các nghiên cứu về vi khuẩn Pseudomonas fluorescens 21

2.6 Protein GFP 24

2.6.1 Cấu trúc và đặc điểm .24

2.6.2 Tình hình nghiên cứu về gene gfp .25

Chương 3 .28

VẬT LIỆU VÀ PHưƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .28

3.1 Thời gian và địa điểm thực hiện .28

3.2 Vật liệu và hóa chất, dụng cụ thí nghiệm .28

3.2.1 Vật liệu .28

3.2.1.1 Vi khuẩn E.coli DH5α (λ-pir) chứa plasmid pUT-gfp .28

3.2.1.2 Vi khuẩn E.coli DH5α (λ-pir) chứa plasmid pRK600 .29

3.2.1.3 Vi khuẩn Pseudomonas fluorescens 29

3.2.2 Các loại môi trường dùng trong nuôi cấy vi khuẩn .31

3.2.3 Các loại dụng cụ, thiết bị dùng trong nghiên cứu 31

3.3 Phương pháp nghiên cứu 31

Chương 4 .34

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .34

4.1 Kết quả .34

4.1.1 Kết quả kiểm tra tính kháng kháng sinh của vi khuẩn .34

4.1.2 Kết quả kiểm tra khả năng phát sáng trên môi trường KB 36

4.1.3 Kết quả khảo sát các điều kiện tối ưu để chuyển gene gfp vào vi khuẩn

Pseudomonas fluorescens bằng phương pháp tiếp hợp ba thành phần 37

4.1.3.1 Khảo sát ảnh hưởng của thời gian nuôi cấy tăng sinh vi khuẩn 37

4.1.3.2 Khảo sát ảnh hưởng của mật độ vi khuẩn 38

4.1.3.3 Khảo sát ảnh hưởng của nhiệt độ khi nuôi chung trên môi trường KB .39

4.1.3.4 Kết quả đối chứng 40

4.2 Thảo luận 41

4.2.1 Các thông số tối ưu cho quá trình tiếp hợp 41

4.2.2 Cơ chế quá trình tiếp hợp ba thành phần .41

4.2.3 Môi trường tối ưu cho chọn lọc .43

4.2.4 Kết quả đối chứng 42

4.2.5 Quy trình tiếp hợp tối ưu cho dòng vi khuẩn nhận Pseudomonas fluorescens

1.8 44

Chương 5 .47

KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ .47

5.1 Kết luận 47

5.2 Đề nghị .47

TÀI LIỆU THAM KHẢO .48

PHỤ LỤC 51

Tối ưu hóa quy tình chuyển gene gfp vào vi khuẩn Pseudomonas fluorescens bằng phương pháp tiếp hợp ba thành phầ