HOÀN THIỆN KỸ THUẬT TRUNG HOÀ VI LƯỢNG (MICRONEUTRALIZATION) TRONG NGHIÊN CỨU HUYẾT THANH DỊCH TỄ HỌC TRÊN NGƯỜI TIẾP XÚC VỚI VIRUS CÚM GIA CẦM H5N1

LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC

MỤC LỤC

LỜI CẢM ƠN

DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT

MỞ ĐẦU .1

Chương 1: TỔNG QUAN 2

1.1 Dịch bệnh cúm gia cầm H5N1 .2

1.1.1 Dịch cúm gia cầm H5N1 trên thế giới .2

1.1.2 Dịch cúm gia cầm H5N1 tại Việt Nam 5

1.1.3 Sự lây truyền virus cúm gia cầm H5N1 .6

1.2 Virus cúm A .9

1.2.1 Phân loại .9

1.2.2 Danh pháp 10

1.2.3 Đặc điểm cấu tạo virus cúm .10

1.2.4. Các subtype hiện nay của virus cúm .14

1.2.5. Sự xâm nhập và sao chép của virus cúm trong tế bào chủ .14

1.2.6. Cơ chế hình thành chủng mới .16

1.2.7. Bệnh học nhiễm virus H5N1 ở người .18

1.2.8. Các biện pháp phòng ngừa và điều trị nhiễm virus H5N1 18

1.3 Đáp ứng miễn dịch chống virus cúm 19

1.3.1. Đáp ứng miễn dịch không đặc hiệu 20

1.3.2. Đáp ứng miễn dịch đặc hiệu .21

1.3.3. Tác dụng bảo vệ chéo .23

1.4 Các phương pháp chẩn đoán virus .24

1.4.1. Phương pháp chẩn đoán trực tiếp 24

1.4.2. Phương pháp chẩn đoán gián tiếp .26

1.4.3. Phương pháp huyết thanh học .27

1.5 Kĩ thuật trung hòa vi lượng (MN) 29

1.5.1. Cơ sở của kĩ thuật .29

1.5.2. Ứng dụng kĩ thuật trong chẩn đoán virus .29

Chương 2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP .31

2.1. Mẫu huyết thanh .31

2.2. Vật liệu .32

2.2.1. Dòng tế bào .32

2.2.2. Chủng virus .32

2.2.3. Kháng nguyên và kháng thể 32

2.2.4. Môi trường và hoá chất .32

2.2.5. Trang thiết bị .33

2.3. Phương pháp nghiên cứu .34

2.3.1. Thu nhận, xử lý và bảo quản mẫu huyết thanh .34

2.3.2. Chuẩn độ kháng thể 34

2.3.3. Chuẩn bị tế bào MDCK 35

2.3.4. Chuẩn bị virus dùng cho phản ứng .36

2.3.5. Xác định liều gây nhiễm 50% tế bào nuôi cấy (TCID50) 37

2.3.6. Phản ứng trung hoà virus 38

2.3.7. Phản ứng ELISA .40

2.4. Xử lý số liệu .41

2.4.1. Kết quả phản ứng trung hòa virus .41

2.4.2. Đọc kết quả .41

2.4.3. Xử lý thông tin về người tiếp xúc .42

Chương 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .43

3.1. Kết quả chuẩn độ kháng thể dùng cho phản ứng ELISA .43

3.1.1. Nồng độ protein của virus cúm gia cầm .43

3.1.2. Chuẩn độ kháng thể dùng cho phản ứng ELISA 44

3.2. Chuẩn bị virus dùng cho phản ứng MN .46

3.2.1. Xác định nồng độ trypsin sử dụng trong gây nhiễm virus 46

3.2.2. Xác định MOI của virus sử dụng trong gây nhiễm .49

3.2.3. Xác định TCID50 của virus P2 dùng cho phản ứng MN 50

3.3. Chuẩn bị tế bào MDCK, thời gian và điều kiện gây nhiễm .51

3.3.1. Xác định mật độ tế bào MDCK thích hợp 51

3.3.2. Xác định thời gian gây nhiễm virus vào tế bào 54

3.4. Đánh giá kết quả thu được của phản ứng MN 54

3.4.1. So sánh kết quả phản ứng MN ở điều kiện có và không có mặt của

trypsin-TPCK .54

3.4.2. Đánh giá độ ổn định của phản ứng MN 56

3.4.3. Đánh giá độ đặc hiệu của phản ứng MN .58

3.4.4. Đánh giá độ nhạy của phản ứng MN .58

3.5. Ứng dụng kĩ thuật MN trong điều tra huyết thanh học 60

KẾT LUẬN .64

KIẾN NGHỊ .66

TÀI LIỆU THAM KHẢO 6