MỤC LỤC

Trang

Trang phụ bìa

Lời cảm ơn

Lời cam đoan

Mục lục

Những chữ viết tắt

Danh mục các bảng

Danh mục các hình vẽ, đồ thị

MỞ ĐẦU 1

Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1. GIỚI THIỆU VỀ XẠ KHUẨN 3

1.1.1. Phân bố của xạ khuẩn trong tự nhiên 3

1.1.2. Đặc điểm hình thái của xạ khuẩn 4

1.1.3. Sự hình thành bào tử của xạ khuẩn .5

1.1.4. Cấu tạo của xạ khuẩn 6

1.2. CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN LOẠI XẠ KHUẨN HIỆN ĐẠI . .8

1.2.1. Đặc điểm hình thái và tính chất nuôi cấy .8

1.2.2. Đặc điểm hóa phân loại (Chemotaxonomy) 9

1.2.3. Đặc điểm sinh lý - sinh hóa .10

1.2.4. Phân loại số (Numerical taxonomy) 10

1.2.5. Phân loại xạ khuẩn chi Streptomyces 11

1.3. CHẤT KHÁNG SINH TỪ XẠ KHUẨN .12

1.3.1. Lược sử nghiên cứu chất kháng sinh .12

1.3.2. Sự hình thành chất kháng sinh ở xạ khuẩn 15

1.3.3. Các yếu tố ảnh hưởng đến sinh tổng hợp chất kháng sinh 16

1.4. MỘT SỐ BỆNH HẠI CHÈ DO NẤM GÂY RA VÀ ỨNG DỤNG CỦA

CKS TRONG BẢO VỆ THỰC VẬT 18

1.4.1. Một số bệnh hại chè do nấm 18

1.4.2. Các chất kháng sinh trong bảo vệ thực vật .21

Chương 2 - NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1. Nguyên liệu và hóa chất .24

2.1.1. Nguyên liệu 24

2.1.2. Hóa chất, dụng cụ và thiết bị .24

2.2. Phương pháp nghiên cứu 27

2.2.1. Phương pháp phân lập nấm gây bệnh từ các mẫu chè .27

2.2.2. Phân lập và tuyển chọn xạ khuẩn 28

2.2.2.1. Phân lập xạ khuẩn theo Vinogradski 28

2.2.2.2. Xác định hoạt tính kháng sinh 28

2.2.2.3.Tuyển chọn các chủng xạ khuẩn sinh chất kháng sinh 29

2.2.3. Bảo quản giống 29

2.2.4. Nghiên cứu các đặc điểm sinh học và phân loại xạ khuẩn 30

2.2.4.1. Đặc điểm hình thái .30

2.2.4.2. Đặc điểm nuôi cấy 31

2.2.4.3. Đặc điểm sinh lý - sinh hóa 31

2.2.5. Lên men tạo kháng sinh .32

2.2.5.1. Lựa chọn môi trường lên men thích hợp .32

2.2.5.2. Ảnh hưởng của nguồn cacbon 33

2.2.5.3. Ảnh hưởng của nguồn Nitơ 33

2.2.6. Các phương pháp sinh học phân tử trong phân lập gen 16S - rRNA 33

2.2.6.1. Tách chiết DNA của xạ khuẩn bằng đệm CTAB .33

2.2.62. Khuếch đại gen 16S - rRNA bằng phản ứng PCR .34

2.2.6.3. Phương pháp điện di trên gel agarose 35

2.2.7. Phương pháp xử lý số liệu .36

Chương 3 - KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

3.1. Phân lập và thuần khiết các chủng nấm gây bệnh trên chè 37

3.2. Phân lập và tuyển chọn xạ khuẩn .38

3.2.1. Hoạt tính kháng nấm của các chủng xạ khuẩn 38

3.2.2. Tuyển chọn các chủng xạ khuẩn có HTKN cao 41

3.3. Đặc điểm sinh học và đặc điểm phân loại của 2 chủng XK Đ1 và R2 42

3.3.1. Đặc điểm hình thái 42

3.3.2.Đặc điểm nuôi cấy . .43

3.3.3. Đặc điểm sinh lý - sinh hóa .45

* Khả năng đồng hóa các nguồn cacbon .45

* Nhiệt độ sinh trưởng thích hợp .46

* Khả năng chịu muối .46

* Khả năng sinh enzym ngoại bào 47

3.3.4. Hoạt tính kháng sinh của 2 chủng R2 và Đ1 48

3.3.5. Vị trí phân loại của hai chủng xạ khuẩn R2 và Đ1 50

3.4. Khả năng sinh tổng hợp CKS của 2 chủng xạ khuẩn đã lựa chọn .52

3.4.1. Lựa chọn môi trường lên men thích hợp .52

3.4.2. Ảnh hưởng của nguồn cacbon .54

3.4.3. Ảnh hưởng của nguồn nitơ 56

3.5. Phân loại các chủng xạ khuẩn theo phương pháp sinh học phân tử 57

3.5.1. Kết quả tách chiết DNA tổng số của các chủng xạ khuẩn 57

3.5.2. Kết quả nhân gen 16S - rRNA bằng phản ứng PCR 58

Chương 4 - KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ

4.1. Kết luận .60

4. 2. Kiến nghị về những nghiên cứu tiếp theo .61

CÔNG TRÌNH CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN 62

TÀI LIỆU THAM KHẢO 63