Đề tài: Tuyển chọn, nuôi cấy chủng Aspergillus oryzae sinh tổng hợp endo-β-1,4-glucanase và xác định tính chất lý hóa của nó

MỤC LỤC

MỞ ĐẦU . 1

CHưƠNG I. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2

1.1. ĐỊNH NGHĨA . 2

1.2. NGUỒN GỐC VÀ PHÂN LOẠI. 2

1.2.1. Nguồn gốc 2

1.2.2. Phân loại enzyme . 3

1.3. CẤU TRÚC. 5

1.3.1. Cấu trúc bậc nhất 5

1.3.2. Cấu trúc không gian . 6

1.4. CƠ CHẾ XÚC TÁC 8

1.5. Khái quát về Aspergillus oryzae 10

1.6. Ứng dụng 11

1.6.1. Trong công nghiệp sản xuất giấy và bột giấy 11

1.6.2. Trong công nghiệp chế biến thực phẩm 12

1.6.3. Trong công nghiệp sản xuất thức ăn chăn nuôi . 13

1.6.4. Trong công nghiệp sản xuất dung môi hữu cơ 14

1.6.5. Trong công nghệ sử lý rác thải và sản xuất phân bón vi sinh 14

1.7. ẢNH HưỞNG CỦA ĐIỀU KIỆN MÔI TRưỜNG ĐẾN KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP ENDO-β-1,4-GLUCANASE . 16

1.7.1. Nguồn carbon . 16

1.7.2. Nguồn nitrogen 17

1.7.3. Nhiệt độ nuôi cấy . 18

1.7.4. Ảnh hưởng của pH môi trường . 18

1.8. TÍNH CHẤT LÝ HÓA CỦA ENZYME . 19

1.8.1. Ảnh hưởng của nhiệt độ . 19

1.8.2. Ảnh hưởng của pH . 20

1.8.3. Ảnh hưởng của các ion kim loại . 20

1.8.4. Ảnh hưởng của dung môi hữu cơ và các chất tẩy rửa . 21

Chương 2. NGUYÊN LIỆU VÀ PHưƠNG PHÁP 22

2.1. NGUYÊN LIỆU VÀ HÓA CHẤT 22

2.1.1. Chủng giống . 22

2.1.2. Thiết bị. 22

2.1.3. Hóa chất . 22

2.1.4. Dung dịch và đệm phá tế bào . 23

2.1.5. Môi trường . 24

2.2. PHưƠNG PHÁP . 25

2.2.1. Nuôi cấy sinh tổng hợp enzyme . 25

2.2.2. Định tính endo-β-1,4-glucanase 25

2.2.3. Xác định hoạt tính endo-β-1,4-glucanase 25

2.2.4. Nghiên cứu ảnh hưởng của một số yếu tốmôi trường lên khả năng sinh tổng hợp endo-β-1,4-glucanase 27

2.2.5. Tinh sạch sơ bộ endo-β-1,4-glucanase 29

2.2.6. Điện di SDS-PAGE 30

2.2.7. Xác định tính chất lý hóa của endo-β-1,4-glucanase . 30

2.2.8. Các phương pháp sinh học phân tử . 32

Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 36

3.1. Sàng lọc chủng nấm mốc có khả năng sinh tổng hợp endo-β-1,4- glucanase cao . 36

3.2. Phân loại chủng nấm sợi A. oryzae VTCC-F-045 dựa vào đoạn gene 28SrRNA 37

3.3. Tối ưu các điều kiện sinh tổng hợp endo-β-1,4-glucanase . 39

3.3.1. Khả năng sinh endo-β-1,4-glucanase theo thời gian . 39

3.3.2. Ảnh hưởng của nồng độ cơ chất cảm ứng. 40

3.3.3. Ảnh hưởng của nguồn carbon. 41

3.3.4. Ảnh hưởng của nồng độ carbon 43

3.3.5. Ảnh hưởng của nguồn nitrogen 44

3.3.6. Ảnh hưởng của nồng độ nitrogen . 45

3.3.7. Nhiệt độ nuôi cấy . 46

3.3.8. Ảnh hưởng của pH nuôi cấy . 47

3.4. Tinh sạch sơ bộ endo-β-1,4-glucanase . 48

3.5. Tính chất lý hóa của endo-β-1,4-glucanase 50

3.5.1. Nhiệt độ phản ứng tối ưu 50

3.5.2. pH phản ứng tối ưu. 51

3.5.3. Độ bền nhiệt . 52

3.5.4. Độ bền pH 54

3.5.5. Ảnh hưởng của dung môi hữu cơ . 55

3.5.6. Ảnh hưởng của một số chất tẩy rửa 56

3.5.7. Ảnh hưởng của ion kim loại . 57

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 59

KẾT LUẬN 59

KIẾN NGHỊ . 59

TÀI LIỆU THAM KHẢO 61

TIẾNG VIỆT . 61

TIẾNG ANH 64

PHỤ LỤC